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1207749239

新虫 (初入文坛)

[交流] PET-28a载体原核表达 已有3人参与

各位同仁,老师,新年快到了,首先祝大家新年快乐。本人最近在做原核表达,有这样一个疑问,我将我的外源基因插入PET-28a载体后,那么在翻译的过程中自ATG-TGA,这个蛋白会有一段是来自载体上序列翻译而来。那么问题来了,如果在插入外源基因的地方插入的是另外一个基因,翻译而来的蛋白同样会有一段来自载体序列,那么与上一个相比,会拥有一段相同的蛋白。如果我用其中的一个抗原的抗体去杂交另外一个抗原,是不是同样能结合,出现杂交结果呢(因为两种抗原是有一部分重叠的,而正是序列上翻译而来的这一部分)。请问各位老师,同仁,会不会出现这种情况,求解惑,谢谢

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鲸鱼2016

新虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-13 20:41:53
我觉得,抗原表位是很小的一段,如果你的抗体是针对一个外源蛋白的,那应该不会和另一个反应,但如果是针对载体的序列的,那就会反应了

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2楼2019-01-26 13:44:34
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-13 20:42:14
简单回答如果你的抗体是针对你的第一个抗原,那么针对另外一个非同源抗原的可能性很小

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3楼2019-01-26 18:28:58
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a13515517892

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-13 20:42:28
如果你的抗体是用你得到的蛋白免疫的,可能会出现这种情况,如果你是买的商业化的抗体,仅仅是针对目前你的蛋白的,出现你说的情况的可能性比较小
4楼2019-01-29 11:24:20
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1207749239

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by a13515517892 at 2019-01-29 11:24:20
如果你的抗体是用你得到的蛋白免疫的,可能会出现这种情况,如果你是买的商业化的抗体,仅仅是针对目前你的蛋白的,出现你说的情况的可能性比较小

是的,因为商品化的抗体是经过优化与选择的。我所描述的问题是用我的自己表达的蛋白免疫的,而且做ELISA确实出现了这种问题,出现抗体交叉强阳性

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5楼2019-01-29 11:30:38
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a13515517892

木虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-13 20:42:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1207749239 at 2019-01-29 11:30:38
是的,因为商品化的抗体是经过优化与选择的。我所描述的问题是用我的自己表达的蛋白免疫的,而且做ELISA确实出现了这种问题,出现抗体交叉强阳性
...

自己用得到的蛋白抗原免疫是有可能出现这种状况的,所以在设计方案的时候就需要去避免有相同的蛋白部分
6楼2019-01-29 11:31:50
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1207749239

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by a13515517892 at 2019-01-29 11:31:50
自己用得到的蛋白抗原免疫是有可能出现这种状况的,所以在设计方案的时候就需要去避免有相同的蛋白部分...

好的好的,谢谢您

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7楼2019-01-29 11:36:38
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