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别踩我的菜

新虫 (小有名气)

[交流] 粪便提取DNA

粪便中提取HP的DNA,粪便中抑制物较多,比较难处理,请问有没有好的提取方法?
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吃瓜的半仙

新虫 (小有名气)

★ ★
别踩我的菜: 金币+2, 感谢 2019-01-21 15:45:39
粪便首先要做预处理:粪便标本加人装有2mL无菌PBS缓冲液(0.05mol/L,pH 7.4)试管中充分振荡摇匀5~10min后3000转/分(rpm)离心5min,收集上清液,此步骤重复2次,最终收集上清液每份1ml置于1.5ml 离心管中。然后上清液12000rpm离心l0min,弃上清后,沉淀物在lmL双蒸水(ddH20)中悬置,混和后12000rpm离心5min,此步骤重复2次,收集沉淀。接下来的步骤就是用酚氯仿的抽提的方法。不过这种化学法花费时间长效果也不一定好,而且苯酚氯仿什么的有毒,用试剂盒操作就安全 简便多了,时间短,差不多半小时就可以了。常用的有凯杰QIAGEN,天根tiangen,百代BIOG等。
2楼2019-01-18 08:35:47
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议楼主先粪便预处理,我们用的BIODAI离心法在预处理后15分钟内就能完成DNA提取实验
3楼2019-03-13 08:56:52
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cizhenhua

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用PBS预处理我觉得太麻烦,我们都是用MP Biomedical的粪便试剂盒,他们家自带预洗液,涡旋一下就好了,用着比较方便。我看最近他们新推出了磁珠法的粪便提取试剂盒,不知道效果咋样,还没试,看宣传貌似挺好。
[img]http://hiphotos.baidu.com/guowangbuwanmei/pic/item/40dffdee8ee92ececf1b3e45.jpg[/img]
4楼2020-03-19 11:22:01
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佛魔不二

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本人常年做人类STR个体识别,常见生物检材各种各样,之前也是各种复杂的工艺,什么苯酚氯仿啊乱七八糟的,最后还是返璞归真,用最简便的磁珠或者硅膜柱试剂盒搞定,了不起前处理用chelex-100加5%—10%的PK前处理一下。
凯杰的M48
博坤的MLII
这两个试剂盒都是老牌子,稳定性很高
5楼2020-05-04 22:49:54
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