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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切问题
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白利利

铜虫 (小有名气)

[交流] 酶切问题

求助：酶切问题
如电泳图
孔道：1    ：5833bp的质粒 KPNI与ECORI双酶切，管1
孔道：2   ： 5833bp的质粒 KPNI单酶切
孔道：3：M 1000,最亮的为5000bp,其余t条带大小为从1000-10000bp
孔道：4 ：  5833bp的质粒 ECORI单酶切
孔道：5：   5833bp的质粒 KPNI与ECORI双酶切，管2
孔道：6：M 1000,最亮的为5000bp,其余t条带大小为从1000-10000bp
孔道：7：6615bp的质粒双酶 KPNI与ECORI切，管1
孔道：8：6615bp的质粒 KPNI单酶切
孔道：9：M 1000,最亮的为5000bp,其余t条带大小为从1000-10000bp
孔道：10：6615bp的质粒 ECORI单酶切
孔道：11：6615bp的质粒双酶 KPNI与ECORI切，管2
孔道：12：MDL2000,:条带：100，250，500，750，1000，2000.
其中我所需要的回收的条带为：5833bp双酶切后，余下的5801bp的条带
和6615bp质粒双酶切后，余下的5822bp的条带。
但是看我的电泳图，不管单双酶切好像能切下很多条带，请问这种酶切情况是否正常？在这样的酶切情况下，我只回收我所需大小的条带能否用于后面的连接试验？连接两个月了，一直没进展，不知是那步出错，还请各位老师指导，不甚感激。在线等待您的解答。先谢过啦 ！
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天道酬勤
1楼 2009-05-05 20:31:08
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白利利

铜虫 (小有名气)
谢谢各位虫友的帮助，我之后用没有酶切的质粒一起跑了电泳，验证是没有切干净，有残存的质粒存在，其他的杂带有的是质粒的三种形式中的一种，失误啊  ，谨记对照的重要性啊  。。。。
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天道酬勤
4楼2009-05-11 20:21:51
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yang0071

木虫 (职业作家)
建议你酶切的质粒量可以少一些，
现在的量太大了，酶切效率很低，不排除还有其它原因
孔2 4 8 10 来看你的质粒都会被切成2断，这个估计是导致你实验一直不成功的原因
还有一种可能是你酶的质量不好或者有星号活性，导致切出2个的
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2楼2009-05-06 15:27:45
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anik

银虫 (正式写手)
质粒量太多了。酶的质量应该没有什么问题的吧。
确保所用酶是唯一的位点？
单酶切倒是比双酶切的条带还要多。。。。有没有可能是顺序错了？
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3楼2009-05-06 15:46:11
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