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western-blot实验常见问题及解决方案
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常见问题 解决对策 两块玻璃板之间灌胶，胶总是不平 玻璃没有洗干净，应该洗得很干净 过硫酸铵和TEMED加量相对较多 加完试剂后应摇匀 总是漏胶 避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损 将两块玻璃板摆放对齐，底部处于同一平面 膜上有明显气泡 操作时将气泡完全排除 靠膜一侧的滤纸应铺平 特异性低 优化一抗 提高一抗和二抗的稀释度 降低SDS-PAGE中蛋白的上样量 背景高 优化封闭液 优化洗涤缓冲液，增加洗涤次数 减少曝光时间 信号低 优化一抗 浓缩样品 选择更高灵敏度的发光液，如enlight等。 |
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