| 查看: 3995 | 回复: 4 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者懦弱的青春将赠送您 20 个金币 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
懦弱的青春捐助贵宾 (小有名气)
|
[求助]
qPCR测定质粒拷贝数
|
|
|
我现在做的是双标准曲线法定量质粒的拷贝数，探针法，做标准曲线的时候遇到问题希望个为大神不吝赐教。 我们选定内参基因为16SrDNA(标准品：手提基因组）待测质粒P50（标准品：手提P50）。但是标准曲线出来，发现P50质粒标准曲线与目的基因组偏差两个数量级，即10^5浓度下，基因组CT=16.7，质粒P50 CT= 25。最终定量出来的目的质粒拷贝数为1万+。我怀疑是标准品拷贝数定量不准，但是经过多次标准品的重提及定量计算，问题依然在。请问会是什么问题产生的影响呢。提取的质粒跑胶后发现出双螺旋条带外还有一个很亮的条带，是聚体？那是不是会影响探针及引物与质粒的结合？或者是引物探针设计不合理？退火温度不合适？ 请各位大神赐教。  1 (1).jpg  1 (2).png  微信图片_20190109150723.png  微信图片_20190109153829.png@biostar2009@wizardfan |
回复此楼» 猜你喜欢
球磨纳米粒子条件
已经有6人回复
-
球磨分散剂
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有215人回复
-
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
渊博震天
版主 (职业作家)
Yeast Display
- MolEPI: 7
- 应助: 212 (大学生)
- 贵宾: 0.043
- 金币: 21777.4
- 散金: 257
- 红花: 55
- 沙发: 1
- 帖子: 4534
- 在线: 688.4小时
- 虫号: 2380836
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
- 管辖: 分子生物
2楼2019-01-09 15:59:04
10