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体外骨细胞药效学研究模型的建立及评价 已有1人参与
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新型有效、简便实用的抗骨质疏松药物细胞药效学研究的开展，对于骨质疏松的药物治疗和新药开发具有十分重要的意义。以往的临床研究和实验表明，龟板和鹿茸都具有一定程度的抗骨质疏松的作用，然而对于仅有龟板和鹿茸组成的复方抗骨质疏松作用机制不清楚。因此将龟甲和鹿茸放在一起组成复方，不掺杂其他成分，在细胞水平研究该复方的抗骨质疏松的作用，为龟板和鹿茸的临床的更多应用提供了依据。 体外细胞药效学研究可以从细胞学角度直接观察药物对细胞的作用，可以避免活体研究时效应细胞针对性不强，体内药物代谢反应、种间及个体间的耐药性差异等缺陷。细胞药效学研究不仅可以确定药物的治疗作用，还能确定药物的一般药理作用，为新药临床试验提供可靠依据。美迪西可以为客户提供药物安全性评价服务，可以选用一种以上动物进行药效试验，还可以选用动物模型或者细胞模型来进行药物的药理作用研究。 龟甲又叫“乌龟壳”，是龟科动物乌龟的背部及腹甲。龟甲中含有多种氨基酸营养成分，具有提高免疫力，调整新陈代谢等功效，其功效主要有解热镇静、强健筋骨。龟甲一般为棕色或者褐色，药性微寒，主要成分为动物胶质、钙、磷。龟甲中的钙对人的身体非常有益，能够达到很好的健骨效果。鹿茸属于一种名贵的药材，在临床上鹿茸的功效也是非常多的，鹿茸里面含有的一些物质能够对骨质进行补充，可以治疗一些老年性的骨质疏松症，而且对于筋骨疼痛，鹿茸也有很好的作用。 进行龟鹿复方对骨细胞的体外细胞药效学研究，首先要体外培养成骨细胞和破骨细胞。 1、建立成骨细胞和破骨细胞的体外培养方法。 成骨细胞和破骨细胞在骨重建中起着主要作用，成骨细胞的主要功能是骨的形成和骨折修复，破骨细胞的主要功能是骨吸收。一切影响成骨细胞和破骨细胞数量和功能的因素都与骨质疏松症的发生有关。因此采用体外培养成骨细胞和破骨细胞的细胞药效学研究进行药物筛选至关重要。 通过酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞。通过碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞。用1，25(OH)_2D_3诱导骨髓单核细胞获得破骨细胞，并用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色进行鉴定。最后应用激光共聚焦显微技术，Bodipy FL Phallacidin荧光抗体和碘化丙啶(PI)进行标记后，观察两种细胞的细胞骨架F-actin。 然后采用传统血清药理学的方法制备含药血清，并对这一方法进行了改进。血清药理学是使用药物给予动物灌胃后一定时间所得血清进行体外研究的新方法。通过对血清药理学方法在中药药效学研究中建立的试验方案进行对比后，发现其应用所得试验结果的好坏与该方法的动物选择、给药剂量与时间、取血时间与血清的处理等均有紧密的关系。传统的方法是对成年大鼠直接灌胃给药，一段时间后取血制备含药血清。 因为骨质疏松症有很大一部分发生在绝经后的女性，雌激素的下降对骨质疏松症有着明显的作用。因此研究者在灌胃前将雌性SD大鼠进行去势处理，消除血清中雌激素的影响，从而更好的研究血清中的药物成分对细胞功能的影响。 2、利用骨细胞建立抗骨质疏松中药细胞药效学评价方法 利用体外培养的成骨细胞，建立了抗骨质疏松中药作用于骨形成的药效学评价方法。通过WST-1检测细胞代谢情况与增殖活力，用酶标仪检测成骨细胞分泌碱性磷酸酶和胰岛素样生长因子的功能。 然后加入龟鹿复方不同剂量组10%含药血清，观察其对成骨细胞各项功能指标的影响。结果发现，高剂量组血清可明显促进成骨细胞增殖、ALP活性和IGF-1的分泌，说明龟鹿复方可以促进成骨细胞的骨形成。 最后用体外培养的破骨细胞，建立抗骨质疏松中药作用于骨吸收的药效学评价方法。研究者用扫描电镜(Scanning Microscope)技术观察破骨细胞形成的骨凹陷；同时检测TRAP(+)细胞数和破骨细胞TRAP活性。最后加入龟鹿复方含药血清进行干预，方法同成骨细胞。 结果表明，中剂量组血清可明显抑制骨髓细胞向破骨细胞转化，抑制骨凹陷形成，降低细胞内TRAP的活性，减少TRAP(+)细胞数。说明龟鹿复方可以抑制破骨细胞的骨吸收功能。 建立抗骨质疏松的体外细胞药效学研究方法，并加入中药龟鹿复方进行验证，发现龟鹿复方的抗骨质疏松作用机制与促进成骨细胞骨形成和抑制破骨细胞骨吸收作用有关。该研究为骨质疏松症的临床应用方面提供了药效学资料，为中药新药的开发打下了基础。 |
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