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[交流]
关于色谱柱的知识与实践
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用液相色谱仪有一小段时间了，还是不很熟悉平常我们会用到的正相柱，反相柱在分析分离药物的应用，请各位老师，师兄师姐们谈谈在工作中色谱柱的应用经验。 [ Last edited by 53167624 on 2009-5-4 at 09:27 ] |
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我先来
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1、反相柱子：一般适用范围比较大。分离极性比较小的物质。极性强的物质先出柱。 ODS就是C18柱子。 RP-8和RP-18分别是C18柱子和C8柱子。 C18柱子和C8柱子是柱子的碳链的长度不一样的。 碳链增长了,也增加了键合相的非极性作用的面积,对保留值和选择性都有影响,随烷基碳链的增长对溶质分离的选择性也增强了.但是对单一或简单组分确实看不出太大区别。 2、正相柱子：一般分离光学异构体和反相柱子不能分离的极性比较大的物质。 APS为NH2柱子 另外diol 代表的是球形硅胶邻二羟基丙基醇基柱，正相柱，极性强的物质后出。 硅胶柱子的特点是可分离异构体，柱子的载样量大，用于制备分离，不污染收集的流分了，缺点是分析应用不方便，如流动相的含水量应该严格控制，再现性较差，需较长的平衡时间，不适用于梯度洗脱。 碱性化合物在氨基和二醇柱上的保留强，而偶极化合物在腈基柱子上的保留强。 建议您看看色谱分析等专业书籍有帮助的。 ODS-A ODS-A液相色谱柱是国际上是销售最好的一种传统色谱柱，同时也是HPLC中应用最广泛的应用。YMC ODS-A液相色谱采用高度封端的表面结构和具有适当的疏水性，广泛地应用于多种化合物的分离。在严格质量控制体系下，对50个以上的参数进行严格控制，保证了稳定的质量。其通常作为液相色谱标准柱。 ODS-AM ODS-AM液相色谱柱是一种高碳含量的C18柱，具有和ODS-A液相色谱柱相似的选择性。二者的主要区别是ODS-AM液相色谱柱采用的是专利的封端技术，采用十分严格的生产技术规范，可提供优良的峰对称性和更高分离效果的重现性，从而改善较难分离组分的峰形。 ODS-AQ ODS-AQ液相色谱填料具有中等强度的疏水性和氢键键合相色谱填料，由于其具有相对高的疏水性，其与ODS-A相比有不同的保留行为，其主要用于碳水化合物的分离，如寡聚多糖类、葡萄糖苷类、药物和天然化合物的分离。 ODS-AL ODS-AL液相色谱柱不仅具有疏水基团的相互作用，而且还具备由硅醇基产生的第二级相互作用，这使其与传统的ODS不同的选择性。当离子间相互作用被优化后，特别推荐用于流动相中含有缓冲液的色谱分离，可以获得高重现性的色谱图。YMC-Pack ODS-AL液相色谱柱采用的是没有封端的高碳含量单层C18相，其只能在残存的硅醇基活性有利于色谱分离时使用，由于容易发生拖尾峰，不推荐在分析胺类或含碱性基团的化合物中使用。 ODS H80, M80, L80 ODS液相色谱填料是一种以硅胶为载体的三种配基覆盖率不同的ODS填料，不同配基覆盖率将影响馏出物中疏水组分的保留行为，馏出物的官能基团或三级结构将决定分离行为的结果。J'sphere ODS液相色谱填料几乎不需要考虑疏水性和氢键键合相之间的相互作用，如离子或相互作用，其多用于分离条件的测定。 色谱柱考虑的问题首先是填料的问题，大多数用于HPLC分离的柱填料使用硅胶填料，基于多孔聚合物担体与键和的有机表层（如C18＆C8），应用范围较广，颗粒的大小（粒度）在HPLC中极为重要，约5um的微粒直径兼顾了分析柱的柱效，反压和寿命。更小的多孔微粒对快速分离很有用。小至1.5um的薄壳微粒对极快速地分离蛋白质等大分子较有用。较窄地粒度分布能保证填充床地稳定、高效和压力降最小。总的来说，3或5um全多孔微球填充HPLC色谱柱，能满足大多数分离地需要。 色谱柱地性能指标主要考虑：理论塔板数，峰不对称因子（AS），两种不同溶质地选择性，色谱柱地反压，保留值地重现性，键和相浓度，色谱柱地稳定性。 有几点看法: 1)本人认为,C18是连接了18烷基碳链的反相固定相的总称.ODS 是以硅胶为基质键合的C18填料,而C18还包括其他基质的填料,比如高聚物小球为基质,氧化铝为基质,氧化锆为基质等键合C18链形成的反相固定相,这些可以称为"C18",但是不是ODS. 2)RP-18也是C18中的一种,不同的公司对C18填料有不同的商业名称,本质应该都是一样的.Merck公司的填料喜欢叫RP-18. 比如Merck 的LiChrospher RP-18, Superspher RP-18,Purospher RP-18. 因此,我认为说"RP-18"是改进型的不妥当.Merck的改进表现在前边的名字上,比如LiCHrospher, Superspher, Purospher表现的是不同的性能. 3) "普通ODS分析酸性、中性或弱碱性化合物时均可以获得较佳的峰不对称度。但当分析药物化合物中的强极性含氮的碱性样品时，样品峰形就极差，拖尾严重，定量分析精度下降",这句话我认为值得商榷.普通的ODS,在分离中性化合物,极弱性的酸或硷化合物的时候可以得到较好的峰形,对于弱至中等极性的酸碱化合物,多数情况下会出现不同程度的拖尾.对于强极性化合物,不单是药物,其他化合物一样,都会出现严重的拖尾现象 再次修改，除掉了不太相关的BDS，应该说论述比较全面了。 C18(C-18)、RP18(RP-18)、ODS有什么区别？ 答：C18(C-18)、ODS、RP18(RP-18)的写法一般人从表面上理解没多大的区别，三者之间常常混用，但在具体的不同场合，从严格意义上讲，还是有一定的区别。 一般认为C18是连接了18烷基碳链的反相固定相的总称，除了硅胶基质外，还可以包括其他基质的填料，比如高聚物小球为基质，氧化铝为基质，氧化锆为基质等键合C18链形成的反相固定相。 而ODS 是以硅胶为基质键合的C18填料。因为大部分的C18柱是硅胶基质，因此，在很多场合内二者混为一体。 ODS其后所标的1、2、3、4、5有的是指含碳的不同，有的是不同代的替换产品，如Spherisorb的ODS-1是指未经封尾处理的,含碳量为5.75%，ODS-2是经封尾处理的，含碳量为11.5%。不同厂家的ODS柱性能差异很大。 RP在不同厂家中使用的含义也不太一致，在waters的色谱柱中，RP18（8）是指经过改进的新型C18（8）柱，其不同在于在经典直链配体之间内嵌极性基团，其选择性同C18（8）有了很大的差异，特别是对含酚基官能团的化合物。Agilent的Bonus－RP柱中RP的含义同Waters。但是在Merck公司的色谱柱中，RP-18同C18意义相同,包括硅胶基质、氧化铝基质、及一体化的Chromolith柱。 因此，光从C18（C-18)、RP18（RP-18)、ODS很难区别不同厂家色谱柱之间结构上的差异，最好从有关厂家的资料中寻找。 |
2楼2009-05-04 09:28:35
sunxingyuan
兑换贵宾
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3楼2009-05-04 19:40:45
