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5楼2005-11-15 16:37:45
转贴-----显微摄影
★ ★
zhlpower(金币+2):thanks ,你这个跟胚胎操作方面的显微操作还是有差别的.
zhlpower(金币+2):thanks ,你这个跟胚胎操作方面的显微操作还是有差别的.
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显微摄影 显微摄影是通过显微镜来拍摄的方法。在动植物检疫工作上是科学研究、经验交流、仲裁谈判不可缺少的手段之一。 要取得良好的显微摄影效果，最重要的是要有良好的显微镜设备和良好的显微镜操作技术。 显微摄影时可以用带镜头的照相机，也可用不带镜头的照相机(但要装摄影目镜于镜筒上面)后者的使用更为普遍。显微摄影比微距摄影具有更大的物像放大比，一般由几十倍到上千倍（普通光学显微镜）。 显微摄影放大倍率可用下式计算： B2 = B1L(mm)/250mm 式中，B1——显微镜的总放大倍数，等于物镜的倍数乘目镜的倍数。 B2——照片底片上影像的放大倍数。 L——目镜至底片的距离。 由上式可知，当底片与目镜距离为250mm时，底片上影像放大倍数与显微镜的倍数相等。 显微摄影中的正确曝光：曝光是显微摄影中的重要环节，曝光的正确与否决定着照片的质量。显微摄影时影响曝光的因素非常多，例如底片的性能，照明光源的强度和色温，照明方法，滤光片使用，物镜的孔径和倍数、物镜与摄影目镜的配合，照相机皮腔的伸长量，被摄标本的颜色和光学性质等等。难于用计算方法求得正确的曝光时间，通常采用试拍法测定。测定时先用毛玻璃对焦，观察毛玻璃面上的亮度，粗估一个曝光时间。装上有底片的暗合，关闭照明灯，将暗合抽开，开灯曝光1s；关灯，遮盖1/5的暗合，再开灯使余下的4/5干版继续曝光1s（总共2s），关灯，再关上1/5暗合，再开灯曝光2s（总共4s）；关灯，再关上1/5暗合，再开灯曝光4s（总共8s）；关灯；关上1/5暗合，再开灯将最后剩下的1/5面积底片曝光8s（总共16s），曝光完毕立即冲洗，冲洗后从深浅不同的条纹中选择反差最适当的，就是这种摄影条件下的正确曝光时间，一般试摄测定时，曝光时间多依几何级数增加，即1、2、4、8、16、32等（黑白胶卷易于冲洗）。 先进的光学显微镜均附设有全自动的摄影装置（如OLYMPUSR的PM-10AD）使用时只要按其操作指引便可获得良好的摄影效果。 显微镜数值孔径与曝光的关系（设数值孔径为0.5时曝光因素为1） 物镜的数值孔径 0.08 0.01 0.25 0.50 0.65 0.85 1.25 曝光因素近似值 40 25 4 1 2/3 1/3 1/8 显微镜倍率与曝光时间的关系（设10倍物镜曝光因素为1） 物镜放大倍数 5× 10× 15× 20× 25× 50× 75× 100× 曝光因素 40 25 4 1 2/3 1/3 1/8 适合显微摄影的显微镜： 1 照相目镜筒，要能承受得住显微摄影装置的重量。 2. 通过双目镜筒，要能对图象进行调焦。 3. 使用光路选择移动杆(Optical Path Selector)能将光亮调到适合标本需要的强度。 4. 物镜要有高分辩率和良好的平场象（整个圆型视场图象都在一个平面上）。 5. 载物台能够转动。 6. 聚光镜带有孔径光阑和调节光轴中心的机构。 7. 显微镜要有视场光阑。 8. 光源要保证有足够的亮度，可以按照观察和摄影的需要来调节光亮度。物镜从低倍到高倍变化时，要求光亮度都能均匀。 9. 显微镜体要有防止外界震动的能力。 10. 要备有插入滤色镜的槽口。 适合显微摄影的显微摄影装置： 1. 要有能够连接显微照相机附件的装置，如35mm照相机后背或大画面底片暗合。 2. 要能够按照摄影中需要的不同光亮条件进行光路调节。 3. 要能够对标本不同的面积进行测光（对30％面积的平均测光，或对１％面积的点测光）。 4. 要能够把照相机附件牢固地固定在显微镜上。 5. 要有色温的测定装置。 6. ISO/ASA感光度要有广泛的选择范围。 7. 要有倒易律失效补偿装置，可以进行长时间的自动曝光。 8. 要能够根据标本的具体情况，进行曝光量的调节。 9. 要能够进行手动曝光。 10. 要能装配特殊用途的装置，如拍16mm电影或35mm胶片的定时定格摄影装置。 11. 控制器内装有自动曝光锁机构。 适合显微镜摄影用的物镜与照相目镜物镜： 物镜：显微摄影需要有高分辩率、广视野平像场的物镜。长筒（Long-Barrel ，缩写LB）物镜如Splan-Apl-Chromat平像场复色差物镜，各系列。短筒(Short-barrel)物镜如Plan-Apl-Chromat平像场复消色差物镜、Plan-achromats平像场消色差物镜系列。这些物镜都是被推荐的。 照相目镜：照相目镜的作用，是为物镜的色差、象差作光学补偿，使投射到感光底片上的图象、四周与中心都尽可能在一个焦点平面上。因此，正确选用生产厂家推荐的照相目镜，是十分重的。 视场光阑的作用：视场光阑的作用，一是根据物镜的倍率给予不同直径的光束面积；二是在显微镜摄影时，起着增减影象反差的作用。当光阑扩大到一定的程度，照射到标本上的光，即会有反射与不规则的散射，造成影象反差的损失。当视场光阑收缩到取景框边缘外的时候，摄影图象的反差就会改善。 孔径光阑的使用与其功能：安装在聚光器中的光阑叫孔径光阑。它的作用是使图象的分辩率、反差和焦深处于最佳状况。这些最佳条件的取得，是以所用物镜的数值孔径来调节照明系统的数值孔径（聚光镜的数值孔径）。大多数的标本，如想得到高质量的照片，孔径光阑要调节在物镜数值孔径的 60％到80％之间。 怎样调节孔径光阑：有两种方法。 第一种，是把标本对好焦点以后，取出左边目镜，用肉眼观察镜筒，边观察物镜的后焦点平面，边用手调节孔径光阑，大小以60％－80％为宜。 第二种，是应用聚光镜上刻的数值孔径的标记。例如：用数值孔径0.25的10×物镜，如让孔径光阑缩小到80％，聚光镜上的刻度标记，应该放在0.2(0.25×80％=0.2)上。 孔径光阑的功能：如孔径光阑收缩过小，会使显微照片分辩率降低。除用特殊染色，标本又切得很薄的以外，孔径光阑的收缩不得低于物镜数值孔径的60％。 孔径光阑完全打开，照片整个反差降低。 如何选购、贮藏和使用彩色胶卷： 1. 选购彩色胶卷时，要注意的问题 (1) 彩色胶卷是高度敏感的物质，它的感光速度与彩色还原都是很容易受破坏因素（如高温和湿度）的影响。当要购买彩色胶卷时，注意别去购买那些将商品架置于阳光照射下的商品。 (2) 要选购有效时间长的彩色胶卷，包装盒上都标明使用期限。 (3) 同一型号的彩色胶卷，由于生产批号不同，彩色还原的效果不一定相同。如果要经常使用用彩色胶卷，最好一次买同一生产批号、乳剂号的产品备用，这样，在同一条件下摄影，就可以避免彩色的变化了。 (4) 注意根据需要选择彩卷的DIN数，类型（如日光型、灯光型等）。 2. 彩色胶卷如何贮藏 彩色胶卷的组成与彩色还原的基本条件与性能的变化，和它的贮藏条件有关。 彩色胶卷平常最好放在冰箱内冷藏。以防高温与湿度对它的影响。要使用时，必须在１小时前从冰箱里取出，以使达到客观存在温以后才能使用。否则，彩色片表面容易产生水气凝聚的弊病。 3. 使用彩色片时应特别注意的问题 (1) 没有必要时，不要把彩色胶卷在相机里存放过久。 (2) 已拍摄的彩色胶卷，要尽快冲洗。 (3) 虽然其他反映条件都相同，如果室温忽高，忽低，也会影响彩色胶卷的颜色还原。 (4) 不要将彩色胶卷放在有害气体（如甲醛）的环境中使用，因为它对彩色还原有不良影响。 |
2楼2005-10-26 10:51:32
3楼2005-10-29 17:11:48
资源----Microinjection Protocol
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zhlpower(金币+2):thanks
zhlpower(金币+2):thanks
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http://tropicalis.berkeley.edu/h ... jection/inject.html 非常详细介绍Microinjection的操作 |
4楼2005-10-29 21:23:10