24小时热门版块排行榜    

查看: 1528  |  回复: 4

实验室小白

新虫 (正式写手)

[求助] 同源重组阳性重组子筛选 已有1人参与

细菌基因敲除,用同源重组的方法,质粒转进去之后在含抗生素平板上长了非常多菌落,这咋筛呢?想请教各位都是怎么做的呢?一个一个筛?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1034714749

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
实验设计的时候确定要敲除的基因并设计好同源臂的话,理论上能长出来的是敲除成功的。长满平板的情况不多见。
可以随机选取几个验证一下试试。

另外需要注意细菌来源,野生菌或者没有做过抗性筛选的菌需要注意,菌本身是否具备了抗性,导致在抗性平板上生长
2楼2018-12-12 15:24:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赤月雪

新虫 (小有名气)

用什么质粒敲的,我做只能长出来十几二十,满板子都是,要不就抗生素没用,要不就你转化效率高的不行了

发自小木虫Android客户端
3楼2018-12-13 15:36:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实验室小白

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 1034714749 at 2018-12-12 15:24:03
实验设计的时候确定要敲除的基因并设计好同源臂的话,理论上能长出来的是敲除成功的。长满平板的情况不多见。
可以随机选取几个验证一下试试。

另外需要注意细菌来源,野生菌或者没有做过抗性筛选的菌需要注意, ...

您说的很有道理,按原理来说确实如此,但就是不知为啥能长这么多,我跑抗性基因的pcr确实也都有,不知道下一步该怎么办了,而且设了阴性对照,没转质粒的一个菌落都不长

发自小木虫IOS客户端
4楼2018-12-13 15:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实验室小白

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 赤月雪 at 2018-12-13 15:36:31
用什么质粒敲的,我做只能长出来十几二十,满板子都是,要不就抗生素没用,要不就你转化效率高的不行了

用的是链球菌的自杀质粒pFW5,设了阴性对照,没转质粒的一个菌落都没长,所以应该不是抗生素的问题,现在不知道下一步应该怎么做了,难过

发自小木虫IOS客户端
5楼2018-12-13 15:56:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 实验室小白 的主题更新
信息提示
请填处理意见