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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR纯化产物直接测序测不出结果？
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任逍遥010

银虫 (小有名气)

[交流] PCR纯化产物直接测序测不出结果？

PCR纯化产物直接测序测不出结果，大约４０００bp，纯化肯定没问题，送了好几个公司都测不出，请大家帮忙！
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1楼 2009-04-29 11:32:51
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
如何确定纯化没问题
另一主要原因是你片段比较大,所以可能需要的量也比较大,我记得做测序时有个片段大小和量的对照表,google一下应该会找到,附我用过的是CEQ2000的protocol
不过更主要的原因是引物的问题,就是你的引物不一定适合于测序,你可以把你的序列放在beacon primer里设计一个合适测序的引物(猜测你是做分子标记,不需要完全测通特别是测翼序列)
最后还不行的话就只能连T载去测了,这样最保险
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2楼2009-04-29 13:37:19
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smallcat227

木虫 (著名写手)
还是建议连T载，直接测简单而且测不出不用花钱，不过毕竟PCR产物直接测序是近几年才有的技术，还不够成熟
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3楼2009-04-29 14:35:08
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任逍遥010

银虫 (小有名气)
非常感谢！！！！
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4楼2009-04-29 15:10:12
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
顺便问下，如果用pfu酶扩的话，没有A末端，怎么去连T。
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-04-29 15:26:34
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anik

银虫 (正式写手)
加上A就可以阿
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6楼2009-04-29 18:52:05
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