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任逍遥010

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 476.6
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在线: 4.1小时
虫号: 655999
注册: 2008-11-17
性别: GG
专业: 无机纳米化学

[交流] PCR纯化产物直接测序测不出结果？

PCR纯化产物直接测序测不出结果，大约４０００bp，纯化肯定没问题，送了好几个公司都测不出，请大家帮忙！

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1楼 2009-04-29 11:32:51

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轻5飞扬

金虫 (正式写手)

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散金: 46
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在线: 52.6小时
虫号: 186318
注册: 2006-02-16
专业: 发育生物学

如何确定纯化没问题
另一主要原因是你片段比较大,所以可能需要的量也比较大,我记得做测序时有个片段大小和量的对照表,google一下应该会找到,附我用过的是CEQ2000的protocol
不过更主要的原因是引物的问题,就是你的引物不一定适合于测序,你可以把你的序列放在beacon primer里设计一个合适测序的引物(猜测你是做分子标记,不需要完全测通特别是测翼序列)
最后还不行的话就只能连T载去测了,这样最保险