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MIRNA浅谈 已有1人参与
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miRNA研究： 通过表达谱分析寻找疾病相关miRNA 并进行发病机理研究，最终应用于肿瘤诊断和治疗，已经成为目前 miRNA 研究的重要方向，下面为您简单介绍miRNA的研究方法。 miRNA的研究方法大致可分为以下几个方面： ①miRNA芯片:利用miRNA 芯片，可以高通量分析不同肿瘤样本或者不同组织中miRNA的差异表达，对靶基因进行分析，及发育变化中的作用。 ②过表达和封闭: 基因功能研究通常采用过表达、干扰、敲除等方法，miRNA的功能研究也不例外。通过导入化学合成的小分子miRNA mimics，或者构建miRNA过表达载体，实现过表达特定miRNA的目的。通过构建抑制miRNA的inhibitor，实现封闭特定miRNA功能的目的。观察靶基因mRNA及编码蛋白表达以及细胞、动物水平的表型变化，进行信号通路研究，是miRNA 功能研究的常用方法。 ③双萤光素酶报告系统:通过生物信息学分析获得miRNA的靶基因及相应的结合位点是功能研究的关键内容。将野生型和结合位点突变的3ˊ-UTR 序列克隆入双萤光素酶报告载体中，通过检测荧光素酶活性，对miRNA以及靶基因结合位点进行体外功能验证。 ④QPCR 验证：用来检测miRNA 以及其靶mRNA 和相关mRNA 等的检测，主要方法有茎环法和加尾法等。茎环法针对特定miRNA 设计引物，特异性好；加尾法采用通用引物，时间短，通量较大。 发自小木虫IOS客户端 |
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