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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 合成表征 » 【求助】关于拍蛋白纤维化的TEM
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babyroqi

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于拍蛋白纤维化的TEM

我的样品是蛋白和量子点反应后的沉淀，不知道这种沉淀是否是蛋白纤维化造成的，所以想拍一张TEM验证一下，但是不知道沉淀该用什么来分散，分散时有什么注意事项？拍TEM时有什么注意事项？请虫友不吝指教！！！
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1楼 2009-04-29 09:30:43
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temedx

专家顾问 (著名写手)
★
babyroqi(金币+1,VIP+0):非常感谢！希望您能继续回答我补充的问题！ 4-29 11:02
用水或者乙醇做分散剂，超声分散一下应该就可以看了。但沉淀里面是不是会有蛋白质？如果这样，应该要采用低电压的生物电镜来观察比较好些。
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Everybodyissobusymindingotherppl'sbusiness,thattheyforgettofindtheirownhappiness.
2楼2009-04-29 09:49:22
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babyroqi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by temedx at 2009-4-29 09:49:
用水或者乙醇做分散剂，超声分散一下应该就可以看了。但沉淀里面是不是会有蛋白质？如果这样，应该要采用低电压的生物电镜来观察比较好些。

谢谢您的指导！
沉淀里应该是蛋白包裹着量子点，所以怀疑是否是蛋白纤维化了，所以想做TEM看下。我看文献知道不能用太高的电压，否则蛋白会被击穿就只能看到量子点了，请问专家用80KV或100KV的电压可以吗？既然观测蛋白纤维化，是否还得对样品染色？检测时准备的样品量需要多少呢?
急盼赐教！
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3楼2009-04-29 10:35:17
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temedx

专家顾问 (著名写手)
★
babyroqi(金币+1,VIP+0):再次感谢您的指导！请您在百忙之中继续回答我的补充问题!非常感谢！！！o(∩_∩)o... 4-29 11:27
我是做HRTEM的，只做过一点有关生物的东西，所以生物样品我不太熟悉，但不少生物样品都有染色这个处理步骤，不同的样品处理方式还不一样，有的用锇酸染色，有的用磷钨酸染色，具体你可以问问做生物电镜的老师，这个对他们来说是家常便饭。

样品的量肉眼能看到就已经很多了，不用准备太多。
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Everybodyissobusymindingotherppl'sbusiness,thattheyforgettofindtheirownhappiness.
4楼2009-04-29 11:09:53
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babyroqi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by temedx at 2009-4-29 11:09:
我是做HRTEM的，只做过一点有关生物的东西，所以生物样品我不太熟悉，但不少生物样品都有染色这个处理步骤，不同的样品处理方式还不一样，有的用锇酸染色，有的用磷钨酸染色，具体你可以问问做生物电镜的老师，这 ...

谢谢您的指导！
我的样品是具有荧光的，只有在紫外灯激发下才能看到，那是不是需要在紫外灯下能看到分散较好的颗粒？但是如果紫外灯下都能看到分散的颗粒，会不会浓度太大？在做TEM时会不会导致做得的图是一大片的黑色哦?
还请您继续不吝赐教！感激万分！！！
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5楼2009-04-29 11:23:54
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temedx

专家顾问 (著名写手)
★ ★ ★
memser(金币+2,VIP+0):3x 4-29 12:44
babyroqi(金币+1,VIP+0):非常感谢!o(∩_∩)o... 4-29 15:05
紫外灯下只是看到荧光，而这些荧光点应该不是只有一个量子点能导致的吧，所以紫外灯下应该比较难判断分散的情况。
至于TEM观察情况，我们只能猜测，需要看了才能有数，要相信电镜室的老师能处理好你的样品，呵呵。
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Everybodyissobusymindingotherppl'sbusiness,thattheyforgettofindtheirownhappiness.
6楼2009-04-29 12:13:05
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★
babyroqi(金币+1,VIP+0): 4-30 11:11
纤维样蛋白的磷钨酸染色效果不是很好，需要长时间染色，线状蛋白不怕染色，你染上10~15分钟，蛋白结构会更清晰一些，而不会被染色液破坏。如果换成醋酸双氧铀效果最好。
还有浓度要低，高浓度会造成碳膜破裂。
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For my life！
7楼2009-04-30 08:12:36
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