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宫点90519

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 非变性胶转膜后显色没有条带

是这样的，LZ最近在做非变性胶的Werstenblot，在跑胶过程中没有出现问题，单一蛋白可以顺利跑下来（可通过考染胶片看到）。
但是后续将该胶片切下进行转膜的时候却出现了问题。
首先是转膜液因为不含有SDS所以一直使用的变性胶的转膜溶液，配方是：3.03gTris，14.42g甘氨酸，800mL水和200mL无水甲醇。
电流为200mA，电功率50P，转膜时间分别试过2h和2h30min，用BSA和TBST分别封闭清洗后孵抗体过夜再用DAB显色并没有条带出来（其中Marker成功转膜到膜上）。
目前正将转膜的时间调整为3h。
我想问一下大家我的实验操作哪里需要改进？是电流电压还是转膜时间，在此谢谢大家了！

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1楼 2018-11-23 21:06:20

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