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小千100

新虫 (小有名气)

[求助] 小白求助已有1人参与

请教一下各位大神,我分子生物学零基础,看了点文献,可是动手做实验很困难,实验室又没人做。
前面有师姐做了个全基因组测序,在此基础上做了有参转录组测序,筛选到几条差异表达基因,我接着做的话可以做功能验证方面?那么首先克隆这个基因采取什么方法。看文献有的RACE;有的提RNA,反转录链接T载体,转化大肠杆菌,之后阳性筛选测序;有的直接提DNA,PCR。
我现在想提RNA,反转录cDNA,PCR,后面纯化后连接大肠杆菌,阳性筛选,测序嘛?求指教,谢谢各位老师。

@biostar2009 @youlinglyw @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
只有理解基因的真正含义以后,就理解基因克隆的时候,为什么有的人会用RNA做模板,而为什么有些使用DNA做模板,后面的话你会灵活运用这些知识做相似的项目,否则后期你还是似懂非懂,不能够做出比较明智的选择
至于你说的想提RNA,反转录cDNA,PCR,后面纯化后连接大肠杆菌,阳性筛选,测序,这些程序是没有问题的!
如果还有什么问题,欢迎私聊
2楼2018-11-23 08:35:40
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

现在网上各种protocol很多的,建议你去网上看看各种实验相关介绍,我跟那位朋友一样,有问题私聊

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奋斗是我们前进的动力!
3楼2018-11-23 09:09:47
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