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新虫 (小有名气)

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请教一下各位大神，我分子生物学零基础，看了点文献，可是动手做实验很困难，实验室又没人做。
前面有师姐做了个全基因组测序，在此基础上做了有参转录组测序，筛选到几条差异表达基因，我接着做的话可以做功能验证方面?那么首先克隆这个基因采取什么方法。看文献有的RACE；有的提RNA，反转录链接T载体，转化大肠杆菌，之后阳性筛选测序；有的直接提DNA，PCR。
我现在想提RNA，反转录cDNA，PCR，后面纯化后连接大肠杆菌，阳性筛选，测序嘛？求指教，谢谢各位老师。

@biostar2009 @youlinglyw @wizardfan 发自小木虫Android客户端

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1楼 2018-11-23 08:11:48

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elmanbio

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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只有理解基因的真正含义以后，就理解基因克隆的时候，为什么有的人会用RNA做模板，而为什么有些使用DNA做模板，后面的话你会灵活运用这些知识做相似的项目，否则后期你还是似懂非懂，不能够做出比较明智的选择
至于你说的想提RNA，反转录cDNA，PCR，后面纯化后连接大肠杆菌，阳性筛选，测序，这些程序是没有问题的！
如果还有什么问题，欢迎私聊