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热休克蛋白10的表达纯化研究及其与子宫内膜癌的关系
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热休克蛋白HSP是一种广泛存在与原核和真核生物中高度保守的蛋白质，热休克蛋白10是热休克蛋白家族的一个类型。进行HSP10重组蛋白表达与纯化研究，可以为该蛋白的放大生产及应用奠定基础。据国外报道，HSP10在宫颈癌、结肠癌、膀胱癌发生模型中表达，且在癌症早期阳性表达率明显升高。此外HSP10与子宫内膜癌也有关系。 为了进行蛋白质功能研究、生物制药和疫苗生产、疾病的基因治疗以及食品和化工用酶制剂等研究，需要进行重组蛋白表达与纯化研究。美迪西生物医药提供蛋白表达服务，其在重组蛋白表达与纯化服务方面经验丰富，拥有多种蛋白表达系统，包括原核蛋白表达系统、酵母蛋白表达系统、昆虫细胞蛋白表达系统（杆状病毒）哺乳动物细胞蛋白表达系统，具备多种融合技术，可以为客户在蛋白表达与纯化方面提供多种选择。 1、热休克蛋白10重组蛋白表达与纯化研究 为了在毕赤酵母表达系统中表达及纯化人热休克蛋白10(heat shock protein 10,Hsp10)，通过取新鲜人胎盘组织提取总RNA，反转录合成cDNA。以其为模版PCR扩增Hsp10基因片段，构建外分泌重组表达载体pPIC9KHsp10，电击转化毕赤酵母GS115菌株，经组氨酸缺陷筛选，获得阳性菌株pPIC9K-Hsp10/GS115。重组菌经甲醇诱导,SDS-PAGE检测蛋白含量,Western blot分析Hsp10特异性。 结果获取了序列正确的Hsp10基因及高表达菌株。表达产物在相对分子质量11 000处可见特异表达条带，Hsp10蛋白表达量为400 mg/L，纯度大于90%；Western blot分析表明，Hsp10具有良好的反应原性和特异性。因此Hsp10在毕赤酵母表达系统GS115中成功表达，为该蛋白的放大生产及应用奠定了基础。 2、HSP10在子宫内膜癌中的表达研究 为了检测HSP10在正常子宫内膜、增生过长子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜癌中的表达情况，探讨其在子宫内膜癌发生发展中的作用，并初步分析其与子宫内膜癌临床病理因素的关系,需要进行HSP10在子宫内膜癌中的表达研究。 采用免疫组织化学SP法检测30例干旱地区常子宫内膜，30例增生过长子宫内膜，15例非典型增生子宫内膜，50例子宫内膜癌中HSP10的分布及表达。 结果发现： （1）HSP10在正常子宫内膜、增生过长子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜癌的阳性表达程度不同(Hc=82.8，P<0.001)：内膜癌中HSP10表达显著高于正常内膜、增生过长内膜、非典型增生内膜，差异具有极显著性统计学意义(P<0.001)；非典型增生内膜中HSP10表达高于增生过长内膜和正常内膜，差异具有统计学意义(P<0.05)；增生过长内膜中HSP10表达高于正常内膜，差异具有显著统计学意义(P<0.01)。 （2）HSP10的阳性表达程度与子宫内膜癌的肌层浸润深度、宫颈受累情况有相关性(P<0.05)，即深肌层浸润、宫颈受累的内膜癌中HSP10表达强于浅肌层浸润、宫颈未受累者：HSP10表达与患者年龄、是否有高血压、糖尿病病史、术前血清CA125／CA199水平、手术病理分期、病理分级、组织学类型、腹水细胞学、淋巴结转移无相关性(P>0.05)。 研究发现HSP10在子宫内膜癌的癌前病变开始出现高表达，这对子宫内膜癌的早期诊断具有重要的意义。因此 （1） HSP10在正常子宫内膜、增生过长、非典型增生和子宫内膜癌中的表达呈递增形式，在子宫内膜癌中高度表达，提示HSP10在子宫内膜癌的发生、发展中可能起某些重要作用，有可能成为子宫内膜癌早期诊断的标志物之一。 （2） HSP10与子宫内膜癌肌层浸润深度、宫颈受累情况有关，提示HSP10可协同其他检查检验方法，对术前评估肌层浸润深度、宫颈受累情况提供一定的诊断依据，对临床手术方式的选择有一定的参考意义。 （3） HSP10只反映肿瘤生物学行为的某一方面，对肿瘤预后的评估是相对局限的。测定HSP10的同时，应结合临床病理学和生物学指标对肿瘤的预后和治疗效果作出综合评价。 然而HSP10可否作为子宫内膜癌的独立预后指标，还有待进一步的大样本研究及追踪。 |
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