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liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化的问题已有1人参与

用Ni柱纯化目的蛋白,结果目的蛋白基本上不挂柱(填料跟His-tag均没有问题),只能纯化到少量的目的蛋白,Ni柱纯化过程取样的SDS-PAGE如图所示。将拿到的少量目的蛋白浓缩,进行排阻层析,结果蛋白流穿,而目的蛋白发挥功能是二聚体。
     请教各位大神,Ni柱时不挂柱怎么解决,纯化到的蛋白形成的多聚体是在哪个过程中形成的,有什么好的解决方案?

蛋白纯化的问题
Ni.png
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花落人亡两不知
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CL哇哈

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2018-11-20 10:43:14
这个不是不结合是结合量少,第一,可以换高载量的镍柱,第二降低上样流速。纯化过程蛋白形成聚体可以通过添加一些添加剂,比如尿素,精氨酸,甘油,Trition x-100等减少蛋白间的作用或聚体的形成,若蛋白中有二硫键 ...

你好,可以问下添加剂的使用浓度吗?还是按照填料耐受剂量加入?
9楼2023-01-30 14:54:53
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuyuxue: 金币+20, ★★★很有帮助 2018-11-20 14:37:51
这个不是不结合是结合量少,第一,可以换高载量的镍柱,第二降低上样流速。纯化过程蛋白形成聚体可以通过添加一些添加剂,比如尿素,精氨酸,甘油,Trition x-100等减少蛋白间的作用或聚体的形成,若蛋白中有二硫键也可尝试加还原剂,但是普通镍柱不耐受还原剂。祝顺利。
2楼2018-11-20 10:43:14
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


试试purimag的Ni磁珠,效果不错

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-12-03 20:43:59
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小树懒很好

新虫 (小有名气)

请问楼主解决了吗,我遇到同样的问题,挂柱效率低,我的蛋白108

发自小木虫Android客户端
4楼2021-04-18 23:20:33
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