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tlytwzwy

新虫 (初入文坛)

[求助] 无二硫键的包涵体复性如何考虑,万分感谢! 已有3人参与

菜鸟正在进行包涵体复性,望大神相助!

该蛋白在大肠杆菌可溶性表达的过程中,大部分以包涵体的形成存在,各种表达条件优化都已经尝试,都没有效果。因此决定进行包涵体复性。预测该蛋白不存在分子内二硫键。请问(1)这种情况下不可溶的原因可能是什么?(2)在包涵体复性过程中,这种没有分子内二硫键的蛋白对于复性液的成分有什么特别要求?(3)如何避免形成分子间二硫键,复性液的成分需要注意什么?(4)氧化还原电势在包涵体复性过程中,除了对二硫键正常配对、避免含有二硫键的杂蛋白的影响之类的作用之外,对于复性过程还有什么关键影响,两者同时加入和不同时加入有什么区别?
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

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★ ★
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tlytwzwy: 金币+2, 有帮助 2018-11-20 20:40:55
1.表达形成包涵体的原因有很多,就是过量表达的堆积,与二硫键有关系,但不是只有二硫键才会形成包涵体,例如脯氨酸含量高了,也容易形成包涵体,真核生物蛋白原核表达时缺少修饰的酶类,也容易形成包涵体等。
2.没有二硫键就可以不加还原剂或氧化还原对。
祝好。
2楼2018-11-20 10:51:37
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1034714749

铜虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
对问题1:主要原因楼上说的差不多了,此外蛋白性质,蛋白的大小,最常见的是真核蛋白在原核表达,都可能造成包涵体形成;
问题2:不需要DTT这类还原剂就好
问题3:一般不会自然形成二硫键的,何况没有添加还原剂
问题4:没有二硫键的蛋白复性没加还原剂是正常的,不清楚是否其他影响,希望其他大神可以解答
3楼2018-11-20 16:53:17
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tlytwzwy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 1034714749 at 2018-11-20 16:53:17
对问题1:主要原因楼上说的差不多了,此外蛋白性质,蛋白的大小,最常见的是真核蛋白在原核表达,都可能造成包涵体形成;
问题2:不需要DTT这类还原剂就好
问题3:一般不会自然形成二硫键的,何况没有添加还原剂
...

对分子间二硫键,您的意思是一般不会自然形成?
4楼2018-11-20 20:39:23
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1034714749

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tlytwzwy at 2018-11-20 20:39:23
对分子间二硫键,您的意思是一般不会自然形成?...

不是字面上的意思,前提还是你所说的蛋白质没有二硫键,这种情况下,复性的时候不会形成二硫键。
5楼2018-11-21 08:53:14
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503276866

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有二硫键不会自然形成的,有二硫键的复性需要添加DTT或者巯基乙醇,没有二硫键可以不用加,复性效果应该一样的
没有最好只有更好
6楼2018-11-21 13:34:11
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