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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 无二硫键的包涵体复性如何考虑，万分感谢！
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tlytwzwy

新虫 (初入文坛)

[求助] 无二硫键的包涵体复性如何考虑，万分感谢！ 已有3人参与

菜鸟正在进行包涵体复性，望大神相助！

该蛋白在大肠杆菌可溶性表达的过程中，大部分以包涵体的形成存在，各种表达条件优化都已经尝试，都没有效果。因此决定进行包涵体复性。预测该蛋白不存在分子内二硫键。请问（1）这种情况下不可溶的原因可能是什么？（2）在包涵体复性过程中，这种没有分子内二硫键的蛋白对于复性液的成分有什么特别要求？（3）如何避免形成分子间二硫键，复性液的成分需要注意什么？（4）氧化还原电势在包涵体复性过程中，除了对二硫键正常配对、避免含有二硫键的杂蛋白的影响之类的作用之外，对于复性过程还有什么关键影响，两者同时加入和不同时加入有什么区别？
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1楼 2018-11-19 22:08:08
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tlytwzwy: 金币+2, ★有帮助 2018-11-20 20:40:55
1.表达形成包涵体的原因有很多，就是过量表达的堆积，与二硫键有关系，但不是只有二硫键才会形成包涵体，例如脯氨酸含量高了，也容易形成包涵体，真核生物蛋白原核表达时缺少修饰的酶类，也容易形成包涵体等。
2.没有二硫键就可以不加还原剂或氧化还原对。
祝好。
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2楼2018-11-20 10:51:37
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1034714749

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对问题1：主要原因楼上说的差不多了，此外蛋白性质，蛋白的大小，最常见的是真核蛋白在原核表达，都可能造成包涵体形成；
问题2：不需要DTT这类还原剂就好
问题3：一般不会自然形成二硫键的，何况没有添加还原剂
问题4：没有二硫键的蛋白复性没加还原剂是正常的，不清楚是否其他影响，希望其他大神可以解答
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3楼2018-11-20 16:53:17
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tlytwzwy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1034714749 at 2018-11-20 16:53:17
对问题1：主要原因楼上说的差不多了，此外蛋白性质，蛋白的大小，最常见的是真核蛋白在原核表达，都可能造成包涵体形成；
问题2：不需要DTT这类还原剂就好
问题3：一般不会自然形成二硫键的，何况没有添加还原剂
...

对分子间二硫键，您的意思是一般不会自然形成？
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4楼2018-11-20 20:39:23
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1034714749

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tlytwzwy at 2018-11-20 20:39:23
对分子间二硫键，您的意思是一般不会自然形成？...

不是字面上的意思，前提还是你所说的蛋白质没有二硫键，这种情况下，复性的时候不会形成二硫键。
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5楼2018-11-21 08:53:14
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503276866

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有二硫键不会自然形成的，有二硫键的复性需要添加DTT或者巯基乙醇，没有二硫键可以不用加，复性效果应该一样的
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没有最好只有更好
6楼2018-11-21 13:34:11
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