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xiaoli8609

银虫 (小有名气)

[交流] western显示条带大于理论值很多是什么原因呢?

我用50mM Tris-HCL,50mMNaCl,1mMEDTA,0.01%NP-40,10%甘油,1mM PMSF,再加上蛋白酶抑制剂提取在烟草中瞬时表达的连有myc标签的蛋白,但是用标签抗做western之后却发现目的条带的分子量高于理论值很多(~20KD)。我想请问大家,这是怎么回事?太费解了~

[ Last edited by xiaoli8609 on 2009-8-25 at 11:28 ]
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

不算多了,转录后修饰会引起蛋白在SDS-PAGE中显示出很不一样的大小,比如磷酸化,糖基化等,或者由于蛋白质的特殊氨基酸组成也会引起这种现象。差几十KDa都有。
2楼2009-04-27 09:09:49
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xiaoli8609

银虫 (小有名气)

请问你能再说得详细一点吗?或者有这方面的资料吗?什么样的蛋白会比较容易发生这些修饰呢?有什么条件,或者有什么预测的网站或软件吗?谢谢!


除了这个原因还有其他的因素吗?
3楼2009-04-30 11:02:33
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

我也不是很清楚了,你可以多查阅一下这个蛋白的文献,会有讨论它的的小的内容的。尤其是刚发现这个蛋白的一些文献。
4楼2009-05-01 10:42:53
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xiaoli8609

银虫 (小有名气)

用在线工具分析了一下,只有一个磷酸化位点,只有这一个位点就引起了分子量成20KD的增加吗?还是会有其他一些方面的原因?请大家帮帮忙啊!
5楼2009-05-23 11:00:05
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