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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 第一次购买酵母细胞，发现生长状态不好
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KIREAH

新虫 (初入文坛)

[求助] 第一次购买酵母细胞，发现生长状态不好 已有1人参与

第一次在Invitrogen上面购买了GFP-tag的酵母菌株。回来培养的时候发现在YPD培养液里面生长比较慢，SD培养液里面长得就更慢了。我是做微流控的，在芯片上单细胞捕获用SD培养的时候发现细胞几乎不分裂。想问问做有没有做酵母培养方向的，出现这种情况应该怎么办？还能挽救吗
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1楼 2018-11-19 09:46:10
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1034714749

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
snoopytbw: 金币+3, 有帮助 2018-11-19 10:49:17
snoopytbw: 金币+3, 鼓励 2018-11-20 11:03:40
筛选过一阵子野生酵母，以及做过一阵子酿酒酵母的代谢组学，只能提供一些建议：
1.普通培养基一般是比较有效的，再多尝试几个培养基，曾经试过PDA分离出很多不常见的野生酵母；
2.为了后续实验，和Invitrogen赛默飞那边的技术人员沟通以下，尝试解决生长条件。很多工程菌的生长条件是比较苛刻的，包括一系列的参数，最重要的是pH，温度。
3.另外菌株也可能在运送过程中失活一部分，检查是否需要复性？复性的步骤？
多检查一下能想到的因素，很多时候实验就是因为想不到的小情况耽误了，最后祝楼主接下来的实验顺利
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2楼2018-11-19 10:37:24
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
我们都是自己标记绿色荧光教秘

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3楼2018-11-19 12:58:23
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KIREAH

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1034714749 at 2018-11-19 10:37:24
筛选过一阵子野生酵母，以及做过一阵子酿酒酵母的代谢组学，只能提供一些建议：
1.普通培养基一般是比较有效的，再多尝试几个培养基，曾经试过PDA分离出很多不常见的野生酵母；
2.为了后续实验，和Invitrogen赛默 ...

感谢~请问PDA培养基显微镜下有荧光吗？它的营养和YPD以及SD相比丰富吗？还有就是酵母复性大概需要几代呢？
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4楼2018-11-19 13:55:34
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1034714749

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by KIREAH at 2018-11-19 13:55:34
感谢~请问PDA培养基显微镜下有荧光吗？它的营养和YPD以及SD相比丰富吗？还有就是酵母复性大概需要几代呢？...

1.PDA属于天然培养基，用马铃薯熬汁做的，理论上不存在荧光。天然培养基营养成分一般比较高，缺点是培养基的批次受制于马铃薯的好坏。
2.菌株在菌粉状态下复性还得取决于菌株本身，建议咨询一下invitrogen。我们实验室拿到菌粉，在没有明确说明书的情况下，一般是先在液体培养基培养48-72 h，待OD值在0.8-1.2之间（取决于是细菌还是真菌）时，转接一次，并保留原始菌液冻存。转接后培养会观察一下生长情况，长势不好就会再转接一次。一般转接2次以内就可以了，其他情况也会发生，就换培养基，查资料了
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5楼2018-11-19 15:18:43
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KIREAH

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1034714749 at 2018-11-19 15:18:43
1.PDA属于天然培养基，用马铃薯熬汁做的，理论上不存在荧光。天然培养基营养成分一般比较高，缺点是培养基的批次受制于马铃薯的好坏。
2.菌株在菌粉状态下复性还得取决于菌株本身，建议咨询一下invitrogen。我们实 ...

谢谢～那我还是先尝试传代来恢复一下活性。

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6楼2018-11-21 07:54:48
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