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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于16596bp长片段扩增
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新虫 (初入文坛)

[求助] 关于16596bp长片段扩增 已有2人参与

我要扩增16956长片段，一共做了4次，样品分别有7，11，10，8个。第一次用的7个样品单程一次扩增成功而且条带挺好的，二代建库然后测序数据也不错;第二次11个也都1次成功，纯化后建库送测了。但是第三次和第四次成功率明显下降，第三次成功了4次，第4次成功了2个。PCR仪，孔位，都是一样的，用的酶和buffer等也都是-20保存用之前混匀。DNA样本都用康为世纪试剂盒提取的，经过检查浓度和纯度都合格。还有哪个方面会导致这样的情况呢？
扩增程序:98℃ 2min.(98℃ 10s.68℃ 10min). 68℃ 20min.4℃ forever

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1楼 2018-11-15 10:18:21
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树影_色彩

新虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，鼓励积极发帖交流互帮互助。 2019-09-23 20:45:35
你好 最近我也遇到扩增长片段问题，请问你的长片段扩增成功了吗？能分享一下做法吗？

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2楼2019-09-23 17:00:13
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kidyi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这么长的片段你是一次性扩增出来的吗？我最近也在克隆一个差不多大小的，分了8段克隆，怎么都P不出来带，你是用的哪个牌子的酶啊，什么系列的？
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3楼2019-10-14 16:59:11
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匿名

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4楼2019-10-15 14:09:44
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