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DIGE问题若干
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提取的是骨头的蛋白质，主要采用丙酮沉淀法。 预冷丙酮1（含10%TCA）沉淀过夜，再用预冷丙酮每1小时洗，洗三次。然后冰浴中挥发丙酮过夜。用裂解液（8mol/L尿素，30mM Tris,1%CHAPS）裂解过夜，离心后取上清。样品浓度约为2ug/ul。 预实验PH3-10,24cm胶条，30V泡涨时电流较高，约为20uA，说明电流较高，离子浓度较高，后来，8000V上去了，胶图结果还不错。 目前打算采用超滤法过滤浓缩以去除盐离子。但是由于担心骨头里面有过多的矿物质，担心会影响接下来的DIGE。所以--- 请做过DIGE的高手过来看哈，以上方案会不会影响DIGE，会不会有问题？比如说染料结合问题以及后续的MS分析。 谢谢~ |
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