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linus20056811

金虫 (初入文坛)

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[交流] 求~~~~果胶酶酶活测定方法【有效期至2009年5月10日】

1·2·3　果胶酶活力检测方法

1·2·3·1　聚半乳糖醛酸酶(PG)　
样管:吸取0·2mL 稀释酶液于试管中,加1·8mL pH3·5的缓冲液配制的果胶底物溶液, 50℃水浴30min后,加2mL DNS,沸水浴10min,冷却后用蒸馏水定容到15mL,摇匀。空白:吸取0·2mL稀释酶液于试管中,加2mL DNS和1·8mL pH3·5的缓冲液配制的果胶底物溶液, 50℃水浴30min,冷却后用蒸馏水定容到15mL,摇匀。在550nm下测定其吸光值。在上述反应体系中,将果胶酶降解果胶底物每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活单位。

1·2·3·2　果胶酯酶(PE)　取4·0mL 1%果胶溶液,45℃水浴平衡5min,加入1·0mL待测酶液, 45℃保温60min,用0·02mol/L的NaOH滴定产生的羧基基团。将每分钟释放出lμmol羧酸的酶量定义为1单位果胶酯酶(PE)酶活。

1·2·3·3　果胶裂解酶(PL)　取2·0mL 0·5%果胶溶液于试管中, 40℃水浴平衡5min,加入0·5mL待测酶液, 40℃保温10min。取上述反应混合物0·5mL,加入4·5mL 0·01mol/L的HCl中,充分混合终止反应。在235nm处测定吸光值,不饱和双键的摩尔吸光系数为5200。将每分钟分解果胶,使235nm处消光值增加1·0的酶量定义为1单位果胶裂解酶(PL)酶活。

氮源          PG(U/mL) PL(U/mL) PE(U/mL)
NH4)2SO4       26·34万    0·385       29758
NH4Cl             25·34万    0·247       26593
尿素          23·48万    0·530       21041
麸皮          26·18万    0·505       28626

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以上是在一篇论文里看到的毕业设计也要测果胶酶酶活
可没有 PG PE PL的酶活计算公式 希望有人能够帮帮忙~\(≧▽≦)/~啦啦啦能够帮多少忙都写下来吧都会有金币的 O(∩_∩)O谢谢
注意：①论文里PE用的是0·02mol/L的NaOH滴定滴定管精确度有限而最后结果精确到了个位
②以上的果胶溶液浓度和配制溶液也不知道查了好多其他资料也都不是很清楚

[ Last edited by linus20056811 on 2009-4-23 at 23:28 ]

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