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henan116木虫 (正式写手)
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[交流]
求助原生质体如何固定化培养？
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您好： 原生质体提取分离后，想要进行固定化培养，但是固定时遇到了难题，向大家求助，恳请您在百忙之中指点迷津！多谢啦！ 我选择的固定剂是角叉菜胶和海藻酸钙！具体方案如下： （1）角叉菜胶 用提取原生质体时的相同渗透压的CPW盐缓冲液溶解角叉菜胶（5%），灭菌121度、30min，冷却至50度左右，与同等体积的原生质体悬浮液混合，但混合的时候马上变成了凝胶状，无法继续进行下一步的操作（混合均匀后滴加到预冷的0.3M的KCL溶液中），我查阅的一些文献上是这么写的，但我按期操作就出现这样的难题，向您请教我的操作那里有问题？或者您有什么高见，请指教？多谢！ （2）海藻酸钙 用提取原生质体时的相同渗透压的CPW盐缓冲液溶解海藻酸钠（2%），灭菌121度、30min，冷却至50度左右，与同等体积的原生质体悬浮液混合，混合均匀后滴加到1%的CaCL2溶液中，按文献的说法 ，应该形成1-4mm的球状原生质体，但我的实验结果是絮状的！不知道我的问题出现在什么地方？恳请高手指点，多谢啦！ 我的联系方式qq 66089335 信箱：panghaihe116@163.com 恳请高手指点迷津！ |
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