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蒿甲醚在SCID小鼠颅内胶质瘤治疗上的研究
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蒿甲醚是一种广泛用于疟疾治疗的中药提取物，近年来发现蒿甲醚可以透过血脑屏障，同时具有抗肿瘤的作用。胶质瘤是一种恶性度高、增殖旺盛、极易发生侵袭转移的中枢神经系统恶性肿瘤。建立SCID小鼠人脑胶质瘤原位模型，并观察蒿甲醚在体内对胶质瘤的抑制及其抗血管生成的作用，为中草药成分蒿甲醚在胶质瘤的治疗提供了研究基础。 SCID小鼠即严重联合免疫缺陷小鼠，是一种先天性T淋巴细胞和B淋巴细胞双重免疫缺陷动物，它可以在一定程度上接受人以及其他动物的组织移植而成为嵌合体小鼠。它在移植人和其他动物的肿瘤后肿瘤成活率高，容易发生浸润合和转移。美迪西可以根据客户的需求提供各种有效的动物模型，用来检测药物的有效性。实验动物有非人类灵长动物、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、裸鼠等各种种类。目前，已经建立多个有效动物肿瘤模型，并经过多方验证和长期实践考验。 1、蒿甲醚在体外对U251人脑胶质瘤细胞增殖的影响, 将浓度为0、50、100、200、400、600及800μmol/L的蒿甲醚孵育U251胶质瘤细胞24、48h，利用MTT法测定细胞增殖活性。然后将利用浓度为0、200、400及800μmol/L的蒿甲醚培养U251人胶质瘤细胞48 h，利用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。最后利用Western blot法检测胶质瘤细胞的磷酸化AKt的表达水平。 结果发现400μmol/L及更高浓度的蒿甲醚培养48 h，U251细胞的增殖活性受到显著抑制，同时随着浓度升高抑制作用增强。与对照组相比，蒿甲醚显著促进U251细胞的凋亡。400μmol/L和800μmol/L浓度的蒿甲醚显著抑制了磷酸化Akt的表达水平。因此蒿甲醚能够以剂量依赖的方式显著抑制U251细胞的增殖活性并促进其凋亡，该抑制作用可能与其抑制Akt信号通路有关。 2、蒿甲醚在SCID小鼠颅内胶质瘤治疗上的研究 有研究者建立了SCID小鼠人脑胶质瘤原位模型，观察蒿甲醚在体内对胶质瘤的抑制及其抗血管生成的作用，探讨蒿甲醚抑制胶质瘤增殖的机制，为胶质瘤的临床治疗提供一种新的思路和方法。 体外细胞基中培养人脑U251胶质瘤细胞 采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法测定蒿甲醚对U251胶质瘤细胞的生长抑制作用，并计算半数抑制浓度(IC50)；采用ELISA法检测蒿甲醚抑制U251胶质瘤细胞的VEGF表达。 （1）构建SCID小鼠人脑胶质瘤原位模型 采用立体定位仪定位麻醉状态小鼠，剪开头皮后，在距矢状缝与冠状缝交点处分别向右向后2mm定位注射点。钻孔后，使用10ul微量注射器垂直于颅骨在小鼠脑部定位点(右侧顶叶区)深5mm处，注入10ul U251人脑胶质瘤细胞，骨蜡填封骨孔，可吸收线缝合头皮，观察小鼠生活状态。在小鼠出现癫痫症状后，经活体左心室灌注后取脑组织肉眼观察肿瘤大体外观及切面，并行HE染色确证肿瘤模型成功构建。 （2）构建24只SCID小鼠U251人脑胶质瘤原位模型 随机分为3组，分别为对照组(生理盐水0.4ml/10g/d)、蒿甲醚组(蒿甲醚50.0mg/kg/d)、替莫唑胺组(20mg/kg/d)。替莫唑胺采用其粉剂制成混悬液灌胃，量为1.65mg/只/d。接种后标记小鼠，每天定时定量给药，并记录生存时间。约接种20天后，当SCID小鼠濒临死亡时行活体左心灌注，取出并固定全部脑组织，分别行肉眼观察、HE切片染色、免疫组化，证实SCID小鼠胶质瘤情况。 结果发现 （1）蒿甲醚可抑制人脑U251胶质瘤细胞增殖，其抑瘤作用呈时间和剂量依赖性； （2）蒿甲醚作用后的U251胶质瘤细胞上清液中VEGF含量和生理盐水组相比明显降低，差异有统计学意义(P0.05)。 （3）成功构建SCID小鼠U251人脑胶质瘤原位模型,经活体左心灌注后取脑组织发现均有肿瘤生长。 （4）蒿甲醚组和替莫唑胺组SCID小鼠的中位生存期较对照组有明显延长(P0.05)；脑组织HE切片染色可见对照组的U251细胞核大深染，呈梭型或不规则形，高倍镜下可见U251细胞向正常脑组织浸润，蒿甲醚组及替莫唑胺组肿瘤细胞密集程度均明显低于对照组。 因此蒿甲醚可抑制人脑U251胶质瘤细胞增殖，其抑瘤效应呈剂量-时间依赖性，且蒿甲醚可能通过抑制VEGF表达而发挥其抗肿瘤作用。研究表明，蒿甲醚可抑制SCID小鼠颅内胶质瘤增殖。 |
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