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kangxueli

[交流] 5金币求助:帮帮忙,DNA如何解链

根据文献上说的,在80—90℃加热15分钟,然后在冰水混合物中迅速冷却,但是在260nm处的紫外吸收值并没有增加,后来我加热了一个小时也没有解开。
  请问各位大侠,做的过程中应注意什么问题,因为我觉得加热的过程中应该是解了,可能冷却的时候又复性了吧

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:13 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
kangxueli(金币+1):谢谢参与
kangxueli(金币+1,VIP+0): 4-20 21:34
DNA是多长的呢?
一般一两百bp好解,再大就难说了……
形成双链的自由能降很大很大,骤冷也不一定能够更多形成单链
2楼2009-04-20 09:54:34
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zhyzx

金虫 (小有名气)


kangxueli(金币+1):谢谢参与
又加热很长一段时间会不会变性掉啊?
学习一下
3楼2009-04-20 13:45:59
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
kangxueli(金币+1):谢谢参与
kangxueli(金币+1,VIP+0): 4-20 21:34
用你描述的方法就可以,热激后迅速,一定是迅速冷却,DNA不会复性。
4楼2009-04-20 17:10:05
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whb8161

木虫 (小有名气)

你加点牛血清蛋白进去试试,解开链后单链与蛋白吸附上,阻止再次形成双链
人生不止寂寞不已
5楼2009-04-24 19:10:07
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cascc

铜虫 (小有名气)

DNA变性可以在PCR仪完成,高温变性94或95度15min应该比较完全,但是一定要迅速拿出放到冰上,不要降温的过程,因为这样会复性。如果你做过酵母转化,用到鲑鱼精DNA的配置,你就明白了变性复性对实验的重要,另外,在做反转录的时候有一个72度5min,之后也是迅速放在冰上,好好理解下。
6楼2009-04-24 21:27:14
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ychh521

木虫 (小有名气)

你可以加入变性剂,在pcr仪中95度变性5分钟,若dna比较长,可以延长时间,同时做一对照,在水中加入相同的变性剂,测量的时候用加变性剂的水做清零校正,变性剂一般用甲酰胺。
7楼2009-04-25 16:17:49
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

引用回帖:
Originally posted by cascc at 2009-4-24 21:27:
DNA变性可以在PCR仪完成,高温变性94或95度15min应该比较完全,但是一定要迅速拿出放到冰上,不要降温的过程,因为这样会复性。如果你做过酵母转化,用到鲑鱼精DNA的配置,你就明白了变性复性对实验的重要,另外, ...

完全同意
会当凌绝顶,一览众山小
8楼2009-04-26 21:20:04
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huhu5860

新虫 (初入文坛)

就用你的方法应该没有问题呀,是不你的片段太长的原因?
9楼2009-04-27 11:17:28
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