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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 5金币求助：帮帮忙，DNA如何解链
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kangxueli

[交流] 5金币求助：帮帮忙，DNA如何解链

根据文献上说的，在80—90℃加热15分钟，然后在冰水混合物中迅速冷却，但是在260nm处的紫外吸收值并没有增加，后来我加热了一个小时也没有解开。
  请问各位大侠，做的过程中应注意什么问题，因为我觉得加热的过程中应该是解了，可能冷却的时候又复性了吧

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:13 ]
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1楼 2009-04-20 09:33:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
kangxueli(金币+1):谢谢参与
kangxueli(金币+1,VIP+0): 4-20 21:34
DNA是多长的呢？
一般一两百bp好解，再大就难说了……
形成双链的自由能降很大很大，骤冷也不一定能够更多形成单链
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2楼2009-04-20 09:54:34
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zhyzx

金虫 (小有名气)
★
kangxueli(金币+1):谢谢参与
又加热很长一段时间会不会变性掉啊?
学习一下
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3楼2009-04-20 13:45:59
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
kangxueli(金币+1):谢谢参与
kangxueli(金币+1,VIP+0): 4-20 21:34
用你描述的方法就可以，热激后迅速，一定是迅速冷却，DNA不会复性。
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4楼2009-04-20 17:10:05
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whb8161

木虫 (小有名气)
你加点牛血清蛋白进去试试，解开链后单链与蛋白吸附上，阻止再次形成双链
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人生不止寂寞不已
5楼2009-04-24 19:10:07
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cascc

铜虫 (小有名气)
DNA变性可以在PCR仪完成，高温变性94或95度15min应该比较完全，但是一定要迅速拿出放到冰上，不要降温的过程，因为这样会复性。如果你做过酵母转化，用到鲑鱼精DNA的配置，你就明白了变性复性对实验的重要，另外，在做反转录的时候有一个72度5min，之后也是迅速放在冰上，好好理解下。
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6楼2009-04-24 21:27:14
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ychh521

木虫 (小有名气)
你可以加入变性剂，在pcr仪中95度变性5分钟，若dna比较长，可以延长时间，同时做一对照，在水中加入相同的变性剂，测量的时候用加变性剂的水做清零校正，变性剂一般用甲酰胺。
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7楼2009-04-25 16:17:49
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
引用回帖:
Originally posted by cascc at 2009-4-24 21:27:
DNA变性可以在PCR仪完成，高温变性94或95度15min应该比较完全，但是一定要迅速拿出放到冰上，不要降温的过程，因为这样会复性。如果你做过酵母转化，用到鲑鱼精DNA的配置，你就明白了变性复性对实验的重要，另外， ...

完全同意
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会当凌绝顶，一览众山小
8楼2009-04-26 21:20:04
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huhu5860

新虫 (初入文坛)
就用你的方法应该没有问题呀，是不你的片段太长的原因？
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9楼2009-04-27 11:17:28
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