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求助菊粉酶活测定问题
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想问一下哪位对菊粉酶活测定有一定见解，我做的时候按照文献上很认真的操作： 取发酵液l于4℃，10000r/min离心10min,取1mL上清液55℃条件下,酶解4ml2%菊粉（pH=5.4，0.2M醋酸缓冲液配制）30min 后,在沸水浴中加热10min 灭活，然后用DNS 法测定还原糖产生量，同步以提前灭活的上清液作对照，结果测出酶活很小，超声破壁后细胞内酶活也很小，而文献报道很大，不知道是不是自己操作有误。 疑问有以下几点“1发酵液离心得上清液中有大量还原糖，对结果有影响，如何去除？2 菊粉溶液一般用多少浓度？2%是不是对酶活有抑制作用？3用什么缓冲液？多少浓度？离子强度对酶活有影响吗？3测量时温度，酸度控制在多少？4取样时间一般在对数期后期？还是稳定期？”另外想问一下有哪位做过的菊粉是从哪里买的，我们用的是自己提取的，感觉还原糖不少，估计对测量结果有影响。 谢谢 |
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