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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 肝素亲和层析纯化人凝血因子IX
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czyw

金虫 (正式写手)

[求助] 肝素亲和层析纯化人凝血因子IX 已有1人参与

文献中用Heparin Sepahrose CL-6B纯化人凝血因子IX时，目的蛋白出峰盐浓度是450mM NaCl，但是我在试验中采用Capto Heparin（Capto Heparin是Heparin Sepahrose CL-6B的升级版）纯化时发现250mM NaCl浓度下目的蛋白就出现了，目的蛋白比活性和收率均低于文献报道。两种凝胶的层析条件均一致，按理说不应该出现这种情况，哪位大神帮忙分析一下，谢谢！！
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1楼 2018-11-06 16:21:49
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Heparin Sepahrose CL-6B和Capto Heparin这两个亲和填料的配基虽然一样，但是基质不一样，然后配基密度就不一样，配基密度不一样，结合载量就不一样，结合载量不一样，结合力就不一样，所以出现你描述的现象是结合力不一样导致的。很正常。
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2楼2018-11-07 12:52:54
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冰001

新虫 (初入文坛)
你洗剂浓度是多少？按理不应该啊，我们也用的是Capto Heparin，我们洗脱是用550洗的
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3楼2018-12-12 13:57:51
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czyw

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冰001 at 2018-12-12 13:57:51
你洗剂浓度是多少？按理不应该啊，我们也用的是Capto Heparin，我们洗脱是用550洗的

我是150mM NaCl洗涤，你是从血浆里面提取人凝血因子IX吗？
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4楼2018-12-19 15:20:48
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czyw

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2018-11-07 12:52:54
Heparin Sepahrose CL-6B和Capto Heparin这两个亲和填料的配基虽然一样，但是基质不一样，然后配基密度就不一样，配基密度不一样，结合载量就不一样，结合载量不一样，结合力就不一样，所以出现你描述的现象是结合力 ...

我当时做载量试验的时候是160IU/ml凝胶，现在上样量是60IU/ml凝胶，收率只有50%，这样太不正常了啥
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5楼2018-12-19 15:22:42
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