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Jiziyouji

新虫 (初入文坛)

[交流] 崩溃求助 已有5人参与

PCR P不出目标条带是什么情况？求解

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1楼 2018-10-31 12:46:26
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lizimu566

木虫 (正式写手)
原因有很多
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2楼2018-10-31 13:58:49
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Jiziyouji

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lizimu566 at 2018-10-31 13:58:49
原因有很多

分析了很多 找不到原因 求解疑

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3楼2018-10-31 14:44:51
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xbbian

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你得问的具体一点才能帮你分析
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4楼2018-10-31 14:51:42
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木元雨

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先看引物，包括退火温度，引物匹配度之类的；再看酶，酶的变性温度，酶的扩增能力，酶的特异性，酶的保存条件之类的；再看模板，是否为目标基因高表达的模板，模板完整性等等

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5楼2018-10-31 16:21:32
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elmanbio

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
具体是什么情况？原因有和多种
一般来说有2大类
1 DNA模板的问题
2 引物的问题
其他基本上都是围绕着2个问题进行调整了
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6楼2018-10-31 17:19:20
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xmcsxq0606

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
体系正确，酶正确，模版正确 胶制得正确 程序正确地情况下p不出的话，请降点退火温度

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7楼2018-10-31 18:00:19
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Jiziyouji

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xmcsxq0606 at 2018-10-31 18:00:19
体系正确，酶正确，模版正确 胶制得正确 程序正确地情况下p不出的话，请降点退火温度

跑过温度梯度了 选择了合适的温度 可是再p的时候就出现某些样p不出来的情况

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8楼2018-11-01 10:33:37
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Jiziyouji

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by elmanbio at 2018-10-31 17:19:20
具体是什么情况？原因有和多种
一般来说有2大类
1 DNA模板的问题
2 引物的问题
其他基本上都是围绕着2个问题进行调整了

引物是新换的 DNA在提完之后也测了浓度 浓度是正常的 可是就是p完显影的时候发现野生型条带是有的 上面一条带没有

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9楼2018-11-01 10:36:20
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Jiziyouji

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 木元雨 at 2018-10-31 16:21:32
先看引物，包括退火温度，引物匹配度之类的；再看酶，酶的变性温度，酶的扩增能力，酶的特异性，酶的保存条件之类的；再看模板，是否为目标基因高表达的模板，模板完整性等等
...

实验室一直都用的那个mix 也试用了别的 显影的时候还是只有野生型的条带 没有上面的条带

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10楼2018-11-01 10:38:07
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