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wmwman306

禁虫 (著名写手)

[交流] loading buffer的配置

求跑琼脂糖凝胶电泳的loading buffer的配置?

(1)网上我查了一下是:
6 × loading buffer : 0.25% 溴酚兰

                               0.25% 二甲苯青 FF

                               15% 聚蔗糖 (Ficoll 400 型 ) (pharmacia)

        我们实验室的配方是:
                       0.25% 溴酚兰 ,40%的蔗糖


(2)loading buffer对实验影响大吗?
有的配的loading buffer呈橘黄色(好像酸性),而有的呈蓝色(碱性)

想请教各位有这方面经验和知识的人。

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bsy330

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wmwman306(金币+15,VIP+0):呵呵 4-18 14:14
我们用的不加二甲苯青   这个没什么关系  只是加了指示的是2条带,不加是一条。一般蔗糖加30-50%都可以的  就是100毫升加30到50克,新配的都是黄色,它是遇碱变蓝,可以加几滴氢氧化钠,只要变蓝就可以了  ph都不用调   加入pcr产物中不要太多  一般就是2到3微升即可   呵呵  个人建议

你的那个图 可能是胶有点问题 或者EB加入量不一样  所以会出现那种情况  EB多了也不行,少了也不行  这个得严格按厂家提供的说明书来加

[ Last edited by bsy330 on 2009-4-12 at 20:05 ]
7楼2009-04-12 20:03:26
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查看全部 8 个回答

liangniao

木虫 (著名写手)


wmwman306(金币+1,VIP+0):xx 4-18 14:13
帮你顶一下
2楼2009-04-12 16:11:55
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j2

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
wmwman306(金币+5,VIP+0):xx 4-18 14:13
个人感觉对结果影响不大,只是显色和让DNA沉下去吧。你实验室一直用的这种配方?应该没问题哦
修炼ing,当虫仙……
3楼2009-04-12 19:04:33
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wmwman306

禁虫 (著名写手)

感觉不知道有不有问题,反正跑胶照的相总感觉不大好
这是用我们实验室的loding buffer
(1)橘黄色的(即配完没调pH)

(2)蓝色(配完调为稍微碱性)


[ Last edited by wmwman306 on 2009-4-12 at 19:18 ]
4楼2009-04-12 19:15:51
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