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如何回复审稿人意见
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审稿人提出3个问题比较棘手，感觉很难回复，想求教大神。 心中的设想是：1.尽可能少补实验；2.能够让审稿人信服。 问题1审稿人问我在做实时定量PCR时是否做了测序？我在方法部分阐述，通过熔融曲线来验证扩增产物的特异性？审稿人似乎对这样的验证方法不够信服。（但是师姐之前发表的文章，在方法部分也是如此阐述，使用熔融曲线判断其特异性）。我问了朋友，她说可以做凝胶电泳。这也是一种手段，但最直接的恐怕还是测序。但是我看很多PCR方法部分都没有提及测序来验证扩增的特异性。我该怎么说服审稿人呢？ 2.实时PCR内参基因个数：审稿人提出仅仅选择一个内参基因很难让人满意，说不符合MIQE指南，我看了下这个指南，指南提出一般在预实验中进行3-4个管家基因的筛选。选择差异最小的那个基因。我们没有进行过这样的筛选，就直接用文献中人家使用的内参基因是什么，我就用了什么内参基因。所以我想如果直接引用文献，是否有说服力？（文献中的细胞和我不同，但是处理条件相同）。 3.最难回答的部分： 我做了免疫组化，发现我要测得蛋白在该种细胞中的表达很低，（文献也报道如此），在第一次回复审稿人意见时，审稿人就提出你是否做了免疫组化来体现这种蛋白具体在哪种细胞中表达？我有给出回答，我把自己的结果和文献中的结果都展示了，（其实导师当初看到我的免疫组化结果，靶细胞中表达很低，就让我不要把这个结果放到文章中，容易被审稿人挑刺。我就补了组织wb，但最后越隐藏审稿人越问）。这样一来，审稿人就会觉得矛盾：这个靶蛋白在这种细胞中表达很低，你为什么还选用这个细胞？我该怎么回答比较好呢？ 4.wb条带；审稿人提出我的条带与内参基因不是在一块胶上跑出来的，因条带的笑脸的方向都不一致。说这样如何保证胶与胶之间的差异？现实是，有时候内参和目标基因分子量很近，没法跑在一块胶上。有时候有趋势的条带，内参又跑的不是很齐，只能重新跑一个漂亮的内参。那么我该如何回复审稿人，让其信服呢？ 在这里先感谢大神的帮助了！！！ |
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