| 查看: 3437 | 回复: 112 | |||
[交流]
细胞污染除菌
|
|||
|
清除细胞污染，对症下药是关键。 一、细菌污染 状态： 细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 解决方法： 1.仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间和压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要检查培养液是否存在浑浊现象！ 2.可在培养液或血清中加Paebacl Rid（杆菌去除剂）或 Bacteria Rid（细胞除菌剂）。 说明：Bacteria Rid特别针对细胞出现耐药细菌污染，有效替换并超越双抗的一款细胞除菌试剂 1.1 杆菌污染 状态： 杆菌，呈杆状，革兰氏染色阳性、阴性或可变，以周生鞭毛运动。当细胞出现杆菌污染，会在显微镜下看到一些杆状游动的小虫子。 解决方法： a. 发现细胞有杆菌污染，弃掉培养基，用pbs清洗3遍； b. 然后按1:1000 比例加入Paebacl Rid 试剂，即：边加边摇匀； c. 每天处理一次，Paebacl Rid 连续处理3-4天，即可完全清除杆菌污染。 1.2 球菌污染 状态： 球菌呈球形或近似球形，其大小以细胞直径来表示，一般为0.5~1.0μm。由于球菌分裂面的不同，根据繁殖以后的状态，常见球菌污染：肺炎双球菌、链球菌、金黄色葡萄球菌等。 解决方法： a. 发现细胞有球菌污染，弃掉培养基，用pbs清洗3-5遍； b. 然后按1:1000 比例加入Bacteria Rid 试剂，即：边加边摇匀； c. 每天处理一次，Bacteria Rid 连续处理3-5天，即可完全清除球菌污染。 除以上污染源外，配液消毒问题、操作问题也是污染原因之一。关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37℃试培养一段时间后观察，如果没有细菌生长就是操作及细胞培养箱环境的问题。 二、真菌污染 状态： 肉眼观察培养基，发现培养基颜色基本无变化，不浑浊，但是培养基中由絮状漂浮物，显微镜下观察，若感染真菌可看到分叉细丝状的结构（不同种类结构不同），若感染霉菌，显微镜下可看到片状的结构，不透明，真菌及霉菌对影响细胞的生长影响不大。 解决方法： 1.保证细胞房的干净整洁，干燥的环境(潮湿的环境利于霉菌及真菌的生长)。 2.控制外来人员进出实验室。 3.对实验室及培养箱进行彻底消毒，推荐使用专门针对细胞培养环境的Zoftic系列抑菌剂。 4.若细胞非常珍贵，且不易获得，可以对污染的细胞采取如下操作。 悬浮细胞：收集细胞并离心，用PBS漂洗，重复此操作数次。贴壁细胞：用PBS轻轻冲洗细胞，重复此操作数次。加入Candida Rid杀灭真菌，清除细胞中存在的念珠菌污染。 三、支原体感染 状态： 显微镜下很难捕捉，培养液一般不会浑浊，国内血清很多没做支原体阴性检测，而支原体是血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是生长缓慢，直至慢慢死去。 解决方法： >>预防：实验室新购买的血清及培养基需检测是否含有支原体，引进的新品种细胞需做支原体检测（推荐使用MycoTest Kit支原体检测试剂盒），向培养基中添加PreNocard Rid-支原体预防剂，预防细胞支原体污染。 >>补救：将 Nocard Rid 支原体去除剂与完全培养液按1:1000-2000比例稀释，加入细胞正常培养；根据细胞污染的严重程度，处理3～6次即可完全清除细胞支原体污染问题。 四、黑胶虫污染 状态： 可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍镜下可看见黑色的小虫游来游去，培养液不浑浊，一般不会太影响，细胞还可以用。常常可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。 解决方法： Nabact Rid-黑胶虫去除剂，1:500-800比例加到培养液中。血清冻融采取逐级冻融等方法。 PreNabact Rid-黑胶虫预防剂，1:1000加到细胞培养液中，正常细胞培养，用于预防黑胶虫污染。 TIPs：细胞操作及细胞培养箱环境问题如何解决？ 1、提高细胞操作技巧，禁止交叉使用枪头，在酒精灯火焰5公分距离内操作。 2、定期对细胞培养箱消毒，培养箱水盘中的水也要定期更换，并使用无菌水。 3、进入细胞房之前及在无菌操作台操作细胞实验之前需使用紫外灯照射30min。定期使用ZoFtic细胞房除菌剂对细胞房空间进行处理。 4、每次开培养箱之前需用酒精消毒双手。 5、用ZoFtic培养箱除菌剂和ZoFtic水盘抑菌剂定期对培养箱进行消毒。 6、配制的培养基需验证无菌后方可进行细胞培养。 摘自：www.zfdows.com |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
陈粒粒憨吞吞» 猜你喜欢
272分材料子求调剂
已经有36人回复
-
275求调剂
已经有8人回复
-
调剂求收留
已经有5人回复
-
一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂
已经有20人回复
-
070300化学学硕311分求调剂
已经有19人回复
-
材料与化工调剂
已经有13人回复
-
材料与化工调剂
已经有33人回复
-
复试调剂
已经有7人回复
-
一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂
已经有17人回复
-
还有化工二轮调剂的学校吗
已经有47人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
安徽农业大学李亚辉教授诚招 化学、农药学、植保类研究生，接收调剂
+5/439
-
烟台大学环境与材料工程学院先进储能材料与器件课题组招收材料、化学、环境方向硕士
+1/86
-
085404 计算机技术 真诚求老师带走 杭电 336 六级已过
+1/84
-
杭州师范大学张龙课题组招诚聘有机合成，光电催化，理论计算与人工智能化学方向博士后
+1/84
-
欢迎调剂到江西水利电力大学理学院能源动力（储能技术）硕士研究生
+1/39
-
【紧急招生】大连工业大学唐晶晶招收2026级化学/化工类调剂硕士生（最后一天）
+1/37
-
煤炭科学研究总院矿山新材料研究院员工博士后招聘
+1/17
-
新出名额：欢迎药学、生物、人工智能、计算机等有班长团支书经历加入-上海
+1/10
-
~【西昌学院资源与环境学院硕士招生调剂】~
+1/9
-
太原科技大学光学工程、光电信息工程接受调剂
+1/8
-
山东大学谢玉生课题组-诚聘博士后/科研助理（长期有效）
+1/8
-
福建农林大学资环学院李香真-姚敏杰教授课题组招收硕士调剂生
+1/7
-
【2026考研调剂学子看过来，关注南昌航空大学高性价比一本高校】
+1/7
-
中山大学课题组招实习生有机合成经验优先
+1/7
-
江西科技师范大学申亮组招研究生
+1/6
-
一志愿211电子信息347求调剂
+1/4
-
齐齐哈尔大学李莉课题组诚招2026级考研调剂生（学硕和专硕）
+1/4
-
0854,0858调剂招生
+1/3
-
长春大学计算机科学技术学院硕士研究生调剂（计算机科学技术、网络空间安全）
+1/2
-
齐鲁工业大学轻工学部 招收材料与化工调剂
+1/2
2楼2018-10-23 12:13:18
4楼2018-10-23 12:53:17
32楼2018-10-24 07:25:15
简单回复
nono20093楼
2018-10-23 12:33
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
`
2018-10-23 13:04
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
呃
2018-10-23 14:04
回复
2018-10-23 14:28
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
2018-10-23 14:43
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
2018-10-23 14:59
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
icebergwu10楼
2018-10-23 16:15
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
syhorchid11楼
2018-10-23 16:15
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
youngen12楼
2018-10-23 16:34
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
youngen13楼
2018-10-23 16:35
回复
slytjiaofei14楼
2018-10-23 16:41
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
hydzp15楼
2018-10-23 17:10
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
刀治茨16楼
2018-10-23 17:13
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
jiaoxg17楼
2018-10-23 17:23
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
信氏呛18楼
2018-10-23 17:24
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
xiaoqiuqiu2019楼
2018-10-23 17:50
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
tzynew20楼
2018-10-23 23:01
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
dgantpa2321楼
2018-10-24 01:33
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
pdpbnbz95722楼
2018-10-24 03:30
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
顶
kutpxg17923楼
2018-10-24 03:47
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
tdfqzmg59224楼
2018-10-24 04:22
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
aamhfkb4825楼
2018-10-24 04:38
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
祝福
w4165804726楼
2018-10-24 05:04
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
n2398376527楼
2018-10-24 05:19
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
k6635497928楼
2018-10-24 05:25
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
dgfjyu93329楼
2018-10-24 06:10
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
aajjktk8530楼
2018-10-24 06:40
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
jueyqhu5631楼
2018-10-24 07:02
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
hxytmyb1633楼
2018-10-24 07:33
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
xzjuy79834楼
2018-10-24 08:18
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
fmhgrz5635楼
2018-10-24 08:23
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
miaojiabing36楼
2018-10-24 08:52
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
pekupz34937楼
2018-10-24 12:28
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
顶
tqgvf99238楼
2018-10-24 12:48
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
wwckdv29939楼
2018-10-24 13:16
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
azpbk2140楼
2018-10-24 13:26
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
xiwenzi41楼
2018-10-24 13:52
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
tzynew42楼
2018-10-24 22:18
回复
似水流年yz43楼
2018-10-26 13:43
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
spc0844楼
2018-10-26 13:48
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫IOS客户端
dongmings45楼
2018-10-26 13:51
回复
kxmmr47146楼
2018-10-26 18:25
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
wdbwftm15847楼
2018-10-27 00:07
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
youngen48楼
2018-10-27 18:46
回复
ndbk39149楼
2018-10-28 12:43
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
yywvvd07650楼
2018-10-28 12:46
回复
小苹果168(金币+1): 谢谢参与
