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ssssjy

新虫 (初入文坛)

[交流] 小分子加入后,dna圆二光谱竟然没变化

本人实验利用圆二想测定DNA与其靶物质结合后的正负峰值的变化。
目前利用MST测定能测出Kd来,其他实验也证明其是可以成功结合,但是在利用圆二测定DNA结构在是否存在靶标物质时并没有变化,关键是峰重合的还很好,超级好。
我们的DNA是B型DNA,在245有负峰,275有正峰,根据文献加入靶标物质后由于结构发生变化应该是两个峰至少有所变化,峰高上升或下降,但目前无明显变化
实验所用缓冲为10mMTris-HCl(pH=7.4,10mM NaCl,5mM MgCl2),还有1%的甲醇(靶标水溶性差),
实验DNA浓度为2×10-6mol/L,DNA:靶标分别设了五个梯度1:0.25,1:0.5,1:1,1:2,1:5,均无明显变化,靶标由于溶解度含有1%甲醇
测量范围为200-350nm,温度为常温
有没有大神可以解救一下,告诉我为什么没有变化呢,万分感谢

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