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dengyougu

木虫 (小有名气)

[交流] [交流求助]关于重组质粒的问题

最近在进行重组质粒的操作,目的基因和载体分别2次单酶切后进行连接,但是由于这几天没时间,所以将它们放在-20摄氏度环境下冻藏,等下星期再连接,不知道这样对实验结果有没有影响?如果有的话,怎么做能消除影响呢?我刚开始做实验不久,希望各位高手多多指教~不胜感激!
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

还不如等到连接当天再切……
裸露的DNA单链容易降解的说
当然如果片段浓度够那没问题,总有能够连上的
2楼2009-04-11 14:00:19
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dengyougu

木虫 (小有名气)

另外还有一个问题就是5.4Kb大小的载体单酶切时间一般多长呀?
3楼2009-04-11 14:00:38
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dengyougu

木虫 (小有名气)

可是我上周已经做好了目的基因的2次酶切,大侠,请问会不会对结果有影响呢?现在心里好怕怕
4楼2009-04-11 14:02:34
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

酶切时间与质粒大小无关
一般取决于浓度和构象,当然还有一些酶比较难搞
但一般情况下按照说明书推荐的就可以了

反正都切了,就试着连连看……
5楼2009-04-11 14:07:38
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

一般问题不大
我们的载体一般是切完了保存在-20度,每次用一点,反复冻融10来次也没有什么问题
6楼2009-04-11 19:04:13
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