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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

另外……切开的怎么能够连进去呢?难道是平端或者单酶切……
11楼2009-04-11 13:41:53
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

双切啊

两个序列,分别双切,不是可以连起来吗?
赠人玫瑰,手有余香。
12楼2009-04-12 21:36:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

那一次转化后的克隆数是不是很少呢?
13楼2009-04-12 22:44:01
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

还好的,不算太少。
赠人玫瑰,手有余香。
14楼2009-04-14 21:50:04
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wuyunzhou

银虫 (小有名气)

你的载体制备肯定有问题,有很多单切的载体混在双切的载体中, 建议两次单切,分别胶回收,确定能把未切完全的载体去掉!!!
15楼2009-04-14 23:07:43
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sunqx

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 胡笳桃子 at 2009-04-10 23:13:30:
最近在做载体构建,遇到一个连接的问题,在此求助了!

12kb的载体,双酶切回收后浓度为150ng/ul;DNA片段双切回收后浓度为80-100ug/ml.

连接体系是这样的:
vector:2.5ul
insert:5ul
buffer:2ul
T4 li ...

您好, 您的问题解决了吗?
16楼2010-03-19 17:31:35
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zjwang

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
当时也遇到几乎和你一样的连接,一样的pCAMBIA1300,一样的5.3K,作了好久,只能一遍遍试了,调整比例。找个好点的酶和感受态细胞,祝福!
17楼2010-03-19 18:02:40
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