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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 12kb载体和5.3kb片段的大片段连接，求助！谢谢了~~~
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
另外……切开的怎么能够连进去呢？难道是平端或者单酶切……
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11楼2009-04-11 13:41:53
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)
双切啊

两个序列，分别双切，不是可以连起来吗？
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赠人玫瑰，手有余香。
12楼2009-04-12 21:36:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
那一次转化后的克隆数是不是很少呢？
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13楼2009-04-12 22:44:01
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)
还好的，不算太少。
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赠人玫瑰，手有余香。
14楼2009-04-14 21:50:04
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wuyunzhou

银虫 (小有名气)
你的载体制备肯定有问题，有很多单切的载体混在双切的载体中， 建议两次单切，分别胶回收，确定能把未切完全的载体去掉！！！
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15楼2009-04-14 23:07:43
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sunqx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 胡笳桃子 at 2009-04-10 23:13:30:
最近在做载体构建，遇到一个连接的问题，在此求助了！

12kb的载体，双酶切回收后浓度为150ng/ul；DNA片段双切回收后浓度为80-100ug/ml.

连接体系是这样的：
vector：2.5ul
insert:5ul
buffer:2ul
T4 li ...

您好， 您的问题解决了吗？
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16楼2010-03-19 17:31:35
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zjwang

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
当时也遇到几乎和你一样的连接，一样的pCAMBIA1300,一样的5.3K，作了好久，只能一遍遍试了，调整比例。找个好点的酶和感受态细胞，祝福！
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17楼2010-03-19 18:02:40
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