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FlashTuna

新虫 (小有名气)

[交流] 鱼垂体RNA提取量小怎么办 已有1人参与

最近提鱼垂体RNA,怎么也提不出来,太小了。Trizol提的时候加200微,感觉还是有点多。
有没有有相关经验的告诉一下,鱼垂体怎么提?

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[ Last edited by 渊博震天 on 2018-10-18 at 08:27 ]
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墨秦墨秦

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-29 09:02:00
鱼大的话,可以正常提取;如果是小鱼的话,垂体RNA提取后跑电泳检测很可能看不到条带,但做逆转录跑定量是可以的。如果样品较多,可以把几条鱼的垂体混在一起进行提取,但是这样很容易掩盖个体间差异。
静待潘多拉的旋律
2楼2018-10-26 17:11:40
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FlashTuna

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 墨秦墨秦 at 2018-10-26 17:11:40
鱼大的话,可以正常提取;如果是小鱼的话,垂体RNA提取后跑电泳检测很可能看不到条带,但做逆转录跑定量是可以的。如果样品较多,可以把几条鱼的垂体混在一起进行提取,但是这样很容易掩盖个体间差异。

跑胶能看到,后来用了三种试剂盒,结果都差不多。跑胶能看到非常淡的条带,测浓度也就20到50ng/ul。
一般我们反转录1ug,浓度比较低,达不到。
实在不行500ng也可以,不过最后要稀释,反转录一管要跑50多个孔…
能稳定50左右也可以啊…

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3楼2018-10-27 11:54:39
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墨秦墨秦

银虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-29 09:02:17
特殊组织特殊对待啊,垂体总量不够1微克的时候,只能把逆转录总量降低,例如500ng。相对定量本身就不是太精确的东西,只能比较一个趋势而已。

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静待潘多拉的旋律
4楼2018-10-28 21:21:57
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