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硅胶柱的分离 已有1人参与
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植物用乙醇提取浸膏，我用二氯甲烷萃取后，想过硅胶柱。第一次做分离，好多都不懂。 1.要如何选择流动相？ 2.在洗脱的过程中，是从极性大的开始还是极性小的。点板子的展开剂如何选？ 3.如果是梯度洗脱，一般每个比例洗脱几个柱体积。 4.装柱子时，一般硅胶占柱子总长的多少合适？ 新手一枚，麻烦大家解答的详细些，谢谢了！ @lifeliuyan 发自小木虫Android客户端 |
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1，流动相的选择是根据你要的化合物的极性大小来选择的，选择合适的展开系统后，用薄层板选择合适的比例，当化合物的点Rf值0.2到0.3之间合适，就可以拿这个比例系统上柱了。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2018-10-17 23:03:52
【答案】应助回帖
| 2楼说的其实就是正常进行硅胶柱层析的流程。首先是展开剂的选择，楼主可以先尝试几种常用的展开剂跑板看看效果，石油醚：乙酸乙酯、乙酸乙酯：甲醇、二氯甲烷：甲醇，这些可以尝试下。跑板效果的好坏主要看展开后成点性怎么样，Rf值的大小，如果成点性不好（跑出来呈条带状或者拖尾），那么这个展开剂可能就是不合适，Rf值的话如2楼所说，0.2-0.3较为合适。其次是装柱，柱子的径高比看你分离的需求（粗分或者细分）。粗分的话，柱子可以矮胖一点，细分的话，柱子就要细高一点。看楼主的描述，应该是才开始进行柱层析，属于粗分阶段，柱子可以矮胖一点。同时，在粗分阶段，尽量不要有我要接样细一点，可能会有单体的想法，在粗分阶段不太会有单体，换句话说，粗分阶段，接样粗一点也是没有关系的。装柱的技巧就不多说了，多练就有感觉了。再者是上样，这个阶段一般不太适合湿法上样（跟样品性质有关），多采用干法上样。最后是洗脱过程，其实每个梯度洗脱几个柱体积是需要通过点板来判断的，这个需要经验的积累。当然，你也可以尝试洗脱3-4个柱体积之后，更换梯度，3-4个柱体积是我们较为常用的。每一个环节还有很多细节，需要楼主在有了过柱经验之后再回过头来反思。先说这么多，楼主好好过柱子吧。 |
3楼2018-11-12 23:31:20