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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 基因敲除细胞系，western和免疫荧光出现阳性（理论上为阴性才对）
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sibei1

新虫 (小有名气)

[求助] 基因敲除细胞系，western和免疫荧光出现阳性（理论上为阴性才对） 已有1人参与

确认基因有一种剪接体，在第一外显子设计sgRNA，单克隆测序发现缺失一个碱基，造成过早出现终止密码子，这就是典型的基因敲除，但是做western却是阳性（抗体识别位点位于终止密码子之后），为什么会这样？
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时代遗孤
1楼 2018-10-11 21:46:16
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
二倍体只敲了一个

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2018-10-12 09:58:15
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sibei1

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2018-10-12 09:58:15
二倍体只敲了一个

测序验证了，等位基因都被敲除，都缺失一个碱基
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时代遗孤
3楼2018-10-12 23:19:46
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
这个剪切体不是主要的，western看到的是其他剪切体

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2018-10-14 13:04:56
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sibei1

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2018-10-14 13:04:56
这个剪切体不是主要的，western看到的是其他剪切体

NCBI给出的剪接体有四个，选择的是四种剪接体共有序列
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时代遗孤
5楼2018-10-15 10:33:13
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sibei1

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2018-10-14 13:04:56
这个剪切体不是主要的，western看到的是其他剪切体

而且确认抗体结合位点位于打靶位点下游
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时代遗孤
6楼2018-10-15 10:34:24
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刘素素55

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也遇到相同问题，请问楼主解决了吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2019-02-25 13:42:22
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