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红红果子

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 1
在线: 13.4小时
虫号: 7340438
注册: 2017-10-21
专业: 兽医传染病学

[求助] 求教扩增目的片段不是扩不出来就是测序结果不对

各位大神老板让我扩增猪的一个基因片段相关的文献报道很少基本只有人的报道然后在一篇毕业论文里找到了说在肾脏的表达量比较高。然后提了猪肾的RNA
做了RT开始扩增
自己和师兄师姐一起设计了将近10对引物用高保真酶完全扩不出来用Taq酶能扩出来片段大小和目的片段也一致但是胶回收去测序和连完载体去测序测序结果和目的片段都完全不一致
想问一下大神们应该是哪方面的问题引物酶模板都换了很多种实在是黔驴技穷了如果是引物有问题的话像这种片段应该怎么设计出靠谱的引物？
NCBI上的基因序列是https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/GQ421749.1

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