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求教 扩增目的片段 不是扩不出来 就是测序结果不对
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各位大神 老板让我扩增猪的一个基因片段 相关的文献报道很少 基本只有人的报道 然后在一篇毕业论文里找到了说在肾脏的表达量比较高。然后提了猪肾的RNA 做了RT开始扩增 自己和师兄师姐一起设计了将近10对引物 用高保真酶完全扩不出来 用Taq酶能扩出来 片段大小和目的片段也一致 但是胶回收去测序和连完载体去测序 测序结果和目的片段都完全不一致 想问一下大神们应该是哪方面的问题 引物 酶 模板都换了很多种 实在是黔驴技穷了 如果是引物有问题的话 像这种片段 应该怎么设计出靠谱的引物？ NCBI上的基因序列是https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/GQ421749.1 |
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