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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有没有大牛P过不连续的基因片段，做克隆用的，一直P不出来
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17621933862

新虫 (小有名气)

[交流] 有没有大牛P过不连续的基因片段，做克隆用的，一直P不出来 已有5人参与

有没有大牛P过不连续的基因片段，做克隆用的，一直P不出来，研二了，完整的克隆都还没学会

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1楼 2018-09-30 00:30:55
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Agonilb

新虫 (小有名气)
★
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不连续的片段是什么意思

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2楼2018-09-30 08:58:40
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17621933862

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by Agonilb at 2018-09-30 08:58:40
不连续的片段是什么意思

就是我要克隆的那个目的基因他是不连续的，中间有内含子

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3楼2018-09-30 13:33:14
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-10-01 10:32:24
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17621933862

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-10-01 10:32:24
要从RNA逆转录成cDNA，cDNA没有内含子，就连续了...

要克隆全长做蛋白表达，可是库里没有全长基因，就算内含子剪切掉了，也没有全长，也不知道哪块表达有我要的蛋白功能！

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5楼2018-10-02 21:45:17
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
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那就做race扩增cDNA全长呗，这还有啥办法。
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。
6楼2018-10-02 22:20:28
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-04 22:38:55
内容已删除
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7楼2018-10-03 01:26:08
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17621933862

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2018-10-02 22:20:28
那就做race扩增cDNA全长呗，这还有啥办法。

对，我也这样打算的

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8楼2018-10-03 23:29:40
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17621933862

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-10-03 01:26:08
这样的话，你的问题应该调整为，如何找到目的基因全长。。
基本方案就是查找文献，根据基因组，RNAseq之类信息，类比其他物种，找到ATG在哪，stop在哪，然后根据这些信息设计引物。
当然，如果没有这些信息，你也 ...

对，就是把库里的序列在ORF 那个软件里比对了，结果没有找到起始密码子，可能在库里非编码区，测序的结果可能有差异，也只有有RACE了，不过这个试剂盒很贵的，想了解一下有谁用过，能不能从pcr开始用，前面逆转录用自己的试剂盒？还有就是我要是做多克隆抗体的话，我是不是就不用克隆全长了，我找到一个抗原决定簇就可以了吧，如何找到这个呢，求助呀？

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9楼2018-10-03 23:34:36
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-04 22:39:09
我的手段是，分段克隆，然后通过融合PCR进行拼接，我的基因是1500bp，分为3个片段，还是算比较容易的

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10楼2018-10-04 01:36:00
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