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新虫 (小有名气)

[交流] 有没有大牛P过不连续的基因片段,做克隆用的,一直P不出来 已有5人参与

有没有大牛P过不连续的基因片段,做克隆用的,一直P不出来,研二了,完整的克隆都还没学会

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Agonilb

新虫 (小有名气)


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不连续的片段是什么意思

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2楼2018-09-30 08:58:40
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17621933862

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Agonilb at 2018-09-30 08:58:40
不连续的片段是什么意思

就是我要克隆的那个目的基因他是不连续的,中间有内含子

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3楼2018-09-30 13:33:14
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-10-01 10:32:24
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17621933862

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-10-01 10:32:24
要从RNA逆转录成cDNA,cDNA没有内含子,就连续了...

要克隆全长做蛋白表达,可是库里没有全长基因,就算内含子剪切掉了,也没有全长,也不知道哪块表达有我要的蛋白功能!

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5楼2018-10-02 21:45:17
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那就做race扩增cDNA全长呗,这还有啥办法。
6楼2018-10-02 22:20:28
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-10-04 22:38:55
内容已删除
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
7楼2018-10-03 01:26:08
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17621933862

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2018-10-02 22:20:28
那就做race扩增cDNA全长呗,这还有啥办法。

对,我也这样打算的

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8楼2018-10-03 23:29:40
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17621933862

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-10-03 01:26:08
这样的话,你的问题应该调整为,如何找到目的基因全长。。
基本方案就是查找文献,根据基因组,RNAseq之类信息,类比其他物种,找到ATG在哪,stop在哪,然后根据这些信息设计引物。
当然,如果没有这些信息,你也 ...

对,就是把库里的序列在ORF 那个软件里比对了,结果没有找到起始密码子,可能在库里非编码区,测序的结果可能有差异,也只有有RACE了,不过这个试剂盒很贵的,想了解一下有谁用过,能不能从pcr开始用,前面逆转录用自己的试剂盒?还有就是我要是做多克隆抗体的话,我是不是就不用克隆全长了,我找到一个抗原决定簇就可以了吧,如何找到这个呢,求助呀?

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9楼2018-10-03 23:34:36
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-04 22:39:09
我的手段是,分段克隆,然后通过融合PCR进行拼接,我的基因是1500bp,分为3个片段,还是算比较容易的

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10楼2018-10-04 01:36:00
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