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求助:铁氰化钾还原法
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最近用铁氰化钾法测还原糖, 步骤:50%乙醇分别定容多糖到2mg/ml、1mg/ml。取不同浓度的样品1ml加磷酸盐缓冲液 (KH2PO4--Na2HPO4,pH6.6,0.2mol/L)2.5ml和10mg/mLK3Fe(CN)6 2.5ml充分混匀后50℃水浴20分钟，后加入100mg/mLTcA三氯乙酸 2.5ml(文献写需要离心,实际操作中并没沉淀)，取上清液2.5ml加蒸馏水2.5ml稀释后加2ml Fec13(1mg/ml)混匀，于700nm处测吸光度。50%乙醇同样操做空白. 最后一步加FeCl3是不是应该显兰色,可是我加入后并没有颜色变化,还是铁氰化钾溶液的黄绿色,吸光度测的也是0 步骤是按照文献的,试剂除TcA三氯乙酸外均是新买的 不知道说的详不详细,想请教虫友是什么原因. |
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