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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] EST的使用问题

本人现在在研究一种菌的基因,需要构建一个载体,但发现该菌的基因序列并不十分清楚,仅有一个est数据库。那如果我需要设计某个基因的引物啊什么的时候,请问我该如何利用这个est数据库?知道的请帮忙解答下,谢谢。。。。
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

EST就是表达序列标签Expressed Sequence Tag的意思,一般是通过mRNA反转录之后生成的cDNA后,克隆出来的,如果你要扩增未知序列的话,一定要注意,EST则是cDNA的一个片段,一般长200-400个核苷酸对。一个全长的cDNA分子可以有许多个EST,但特定的EST有时可以代表某个特定的cDNA分子。两端有重叠的共有序列的EST可以组装成一个叠连群(contig),直到装配成全长的cDNA序列,这样就等于是克隆了一个基因的编码序列,所以,你要注意的就是根据EST设计引物pcr之后有可能不是你要的整个基因。

[ Last edited by sutao1979 on 2009-4-8 at 16:32 ]
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-04-08 16:26:47
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