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MC3T3-E1细胞ALP、茜素红染色问题 已有1人参与
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各位虫友好，本人工科生一枚，因研究方向和生物医疗材料相关，最近在学习培养细胞，在实验过程中有一些疑惑，还望大家能不吝赐教，谢谢大家。 我用的是MC3T3-E1细胞，用的培养基是α-MEM+10%胎牛血清+4%双抗。最近一次实验是把一培养皿盘细胞传了12孔板，培养24h后加入了样件，继续培养48h后做ALP和茜素红染色，ALP未有明显结果，茜素红染色有矿化结节。 1、文献中茜素红染色通常是在14-28d后才有较明显的结果，而且一般加入诱导液。我的实验细胞传代之后24h加样件，48h后就有矿化，且没有加入诱导液，是否有问题？ 2、实验过程中样件似乎有溶解，有部分颗粒溶出，因为样件中有钙的成分，我想知道是否会对茜素红染色结果有干扰。但在没有加入样件的对照组也有矿化现象。 3、加入样件后，部分样件所处位置及附近不长细胞或者细胞死亡，这是否说明该材料生物相容性不佳。但茜素红染色结果似乎说明该材料能促进骨矿化，二者是否矛盾。 4、ALP结果不明显，但茜素红结果还可以，这两者都是检测骨分化的，是否有矛盾。 描述的比较凌乱，感谢大家的包容与指导。 图片链接: https://pan.baidu.com/s/1N0HVn8nJ9szegbDbIw8QNg 提取码: 4cr9 |
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zhangyang6665
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
淡墨初夏: 金币+15 2018-09-28 12:43:21
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淡墨初夏: 金币+15 2018-09-28 12:43:21
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楼主作为工科生，把细胞实验想的有点过于简单了，建议找个技术成熟的课题组学习个两个星期，最后的结果可能事半功倍。因为通过楼主的描述，实验设计中就是一堆错误（不是你的错，是你导师的错），这样的实验做了只会浪费药品，除了结果也不可靠，投了文章很那被接收， 只会浪费了你宝贵的研究生时间！ 1： Mc3t3 作为成骨细胞，ALP高表达基本都是一周以后了，钙结节更是比较晚期了，所以搞不懂设计48h的意义在哪里？ 2： 茜素红是检测钙离子的指标，如果楼主材料中含有一定的可释放钙离子，染出来的结果怎么让人信服？ 3：目前用细胞系作为生物学检测已经被淘汰了，楼主继续用MC3T3只会在投稿时引来一堆问题 4： 楼主的照片中很多死细胞，还不清楚是由于操作引起的细胞死亡还是材料的毒性引起的 所以建议楼主找一个好的实验室学学，或者直接和其它课题组合作，让别人做生物相容性检测。 祝好！ |
2楼2018-09-27 17:07:07
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感谢zhangyang6665的建议与指正，作为之前从来没有接触过这方面的新手，要比较周到和完美地进行实验确实有点困难。现在还有一点疑问希望答主能指点一二。 1、上述实验只是预实验，正式实验还未开展。48h的意义我也不是很明白，现在尝试做14d的茜素红染色。 2、关于染色结果，确实考虑到可能有材料溶出带来的影响，但未加材料的对照组也染出了结果，关于这一点我一直没想明白。 3、因为楼主还是主要做材料和工艺，所以生物相容性只是一个点缀，并不是文章的主要部分。用这个细胞也是参考了相关文献和其他医学院同学的意见。不知道答主说的比较先进生物学检测手段主要是什么。 4、关于样件周围死细胞比较多，我们现在确定和样件在培养过程中由于认为的拿取观察会产生移动，细胞死亡和这一点有比较大的关系。我们对样件移动也很头疼，不知答主有没有此方面的经验。 再次感谢答主不吝赐教。 |
3楼2018-09-28 12:42:49
guomin0901
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guomin0901
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