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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 对于稀蛋白质溶液的含量选用那种定量方法
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cy22ed

新虫 (初入文坛)

[交流] 对于稀蛋白质溶液的含量选用那种定量方法

对于稀蛋白质溶液的含量选用那种定量方法？
若用215nm和225nm的吸光度差⊿A（⊿A= A215- A225）来测定浓度，准确率如何。
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1楼 2009-04-08 10:53:31
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

大约多稀？

★
cy22ed(金币+1):谢谢参与
对于一般的蛋白来说，10-100 mg/L 可以取2000 uL 加最终浓度为6%的三氯乙酸（TCA）来浓缩，离心沉淀加200 uL溶液体积。这样可浓缩10倍。

具体测定可参考下面修改：

1. 精确量取样品液2000 μL于EP管内，加入60% 三氯乙酸TCA 溶液400 μL, 混匀使产生白色沉淀，静置约10 min, 离心12000 g ×10 min；
2. 先用 1000 μL枪头小心吸出上清液约 2000 μL, 再用 200 μL枪头吸出上清液使剩余溶液约为100 μL, 加入6% 三氯乙酸TCA 溶液1000 μL冲洗管壁, 室温静置约10 min, 离心12000 g×10 min；
3. 先用 1000 μL枪头小心吸出上清液约 1000 μL, 再用 200 μL枪头吸出上清液使剩余溶液约为60-70 μL, 加入1.0 N NaOH 溶液60 μL, 弹匀使碱液涂满整个管壁以完全溶解蛋白沉淀，室温静置约30-60 min 直到沉淀完全溶解，加入1N HCl 溶液60 μL， 混匀后即可测定蛋白浓度。

最后溶解的总体积自己把握好，如果你有足够的样品稀溶液，例如5-10ml更好。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2009-04-08 13:43:00
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

很不准

引用回帖:
Originally posted by cy22ed at 2009-4-8 10:53:
对于稀蛋白质溶液的含量选用那种定量方法？
若用215nm和225nm的吸光度差⊿A（⊿A= A215- A225）来测定浓度，准确率如何。

不信，你随便拿磷酸盐或Tris-HCl溶液来测测就知道了。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-04-08 13:45:00
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cy22ed

新虫 (初入文坛)
谢谢了，浓缩是个办法。但是我的样品太多了，蛋白浓度基本上都小于0.1mg/mL，想用个快速方便的方法，测定稀蛋白溶液含量的方法还有什么呢？
我看书上说氯化钠硫酸铵以及0.1mol/L的磷酸，硼酸和Tris-HCl对215nm和225nm吸光度差⊿A都无显著干扰作用的。
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4楼2009-04-08 17:15:28
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