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cy22ed

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[交流] 对于稀蛋白质溶液的含量选用那种定量方法

对于稀蛋白质溶液的含量选用那种定量方法？
若用215nm和225nm的吸光度差⊿A（⊿A= A215- A225）来测定浓度，准确率如何。

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1楼 2009-04-08 10:53:31

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HarveyWang

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大约多稀？

★
cy22ed(金币+1):谢谢参与

对于一般的蛋白来说，10-100 mg/L 可以取2000 uL 加最终浓度为6%的三氯乙酸（TCA）来浓缩，离心沉淀加200 uL溶液体积。这样可浓缩10倍。

具体测定可参考下面修改：

1. 精确量取样品液2000 μL于EP管内，加入60% 三氯乙酸TCA 溶液400 μL, 混匀使产生白色沉淀，静置约10 min, 离心12000 g ×10 min；
2. 先用 1000 μL枪头小心吸出上清液约 2000 μL, 再用 200 μL枪头吸出上清液使剩余溶液约为100 μL, 加入6% 三氯乙酸TCA 溶液1000 μL冲洗管壁, 室温静置约10 min, 离心12000 g×10 min；
3. 先用 1000 μL枪头小心吸出上清液约 1000 μL, 再用 200 μL枪头吸出上清液使剩余溶液约为60-70 μL, 加入1.0 N NaOH 溶液60 μL, 弹匀使碱液涂满整个管壁以完全溶解蛋白沉淀，室温静置约30-60 min 直到沉淀完全溶解，加入1N HCl 溶液60 μL，混匀后即可测定蛋白浓度。

最后溶解的总体积自己把握好，如果你有足够的样品稀溶液，例如5-10ml更好。