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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关PCR
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zhjwin

铁虫 (初入文坛)

[交流] 有关PCR

请教各位大侠:我第一次能扩出来,但是后面就是扩不出来,一样的引物,一样的条件,一样的试剂,为什么呢?
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1楼 2009-04-07 15:17:13
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longfeng

金虫 (小有名气)
可能是你的酶没有保护好吧，或者引物或模板降解
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2楼2009-04-07 16:10:57
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dj04164

木虫 (正式写手)
看看用的水有没有问题，上次做就是，搞到最后是水的问题
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3楼2009-04-07 16:20:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
那就是模板和机器的问题……
要不降低点退火看看
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4楼2009-04-07 17:05:25
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350784478

木虫 (正式写手)
看看你的模板也没有问题，通过内参来检测，要是内参也没有跑出来，那就是你模板的问题，能跑出来，再考虑其他的问题。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
5楼2009-04-07 19:29:53
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makubex83

至尊木虫 (知名作家)
我猜测是DNA模板，或者TAQ酶失活吧，再有就是你加样的时候多注意一下
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6楼2009-04-07 22:45:49
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xutao

金虫 (著名写手)

第三军团总参谋
我和你同样的情况，我到现在还没p出来
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第三军团
7楼2009-04-07 23:39:24
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zhjwin

铁虫 (初入文坛)
我的酶是新开的,用的水是以前已经灭菌的三蒸水分装到1.5ml的ep管,每次都是用新的,而且后面做了温度梯度,所以应该可以排除退火温度影响.我的那对引物第一次p的时候目的片段很单一,只有一个管有杂带,其余的都只有一条,片段大小都一样.但是现在无论怎样重复都不行,跑出来的胶白的很干净!!!
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8楼2009-04-08 09:38:30
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zhjwin

铁虫 (初入文坛)
[quote]Originally posted by 350784478 at 2009-4-7 19:29:
看看你的模板也没有问题，通过内参来检测，要是内参也没有跑出来，那就是你模板的问题，能跑出来，再考虑其他的问题。 [/quot
内参?我不是很懂,能说说吗?
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9楼2009-04-09 10:16:13
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鱼儿2008

材料很关键的 看看有没有DNA 的啊
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10楼2009-04-09 11:04:08
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