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肉嘟肉嘟嘟

新虫 (初入文坛)

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[交流] 线虫RNA提取已有4人参与

各位虫友都是如何提取线虫RNA的？求大佬支招。

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1楼 2018-09-12 09:33:17

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北京金百特

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

2楼2018-10-15 03:51:34

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ssd一级生

新虫 (初入文坛)

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Trizol试剂盒提取。先收集L4时期的线虫，一般2000条到1.5ml EP管中加500ul trizol匀浆（研磨）2min，研磨后再加500 ul trizol ,RT孵育30min，加200 ul氯仿，vortex 15s，RT孵育15min，4℃离心（12000g/15min）.转移上层液相至新的1.5 ml EP管（不要吸到中间相），加500 ul 100%异丙醇，RT孵育10min ，RT离心（12000g/15min）,移走上层液体，加1ml 75%的酒精清洗，上下颠倒几次即可，RT离心（7500g/5min），吸走酒精，空气中干燥。加15 ul ddH2O溶解。
整个过程中要注意RNA酶的污染。

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章莹_2014

3楼2018-10-26 17:25:05

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章莹_2014

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by ssd一级生 at 2018-10-26 17:25:05
Trizol试剂盒提取。先收集L4时期的线虫，一般2000条到1.5ml EP管中加500ul trizol匀浆（研磨）2min，研磨后再加500 ul trizol ,RT孵育30min，加200 ul氯仿，vortex 15s，RT孵育15min，4℃离心（12000g/15min）.转移 ...

请问楼主线虫提取rna时，OD值总是在1.6-1.7左右，总是找不出是哪里出了错，如果楼主有经验，能否提供点意见。

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4楼2019-03-11 10:33:43

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