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求提取根结线虫RNA的方法 已有1人参与
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我想用trizol法提取现充的RNA，但由于线虫虫体肉眼看不见，液氮冷冻条件下如何进行研磨？或者各位大佬有其它提取线虫的方法分享一下，感激不尽。 发自小木虫Android客户端 |
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凌霄之志
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2楼2018-09-11 20:51:48
3楼2018-09-11 20:55:07
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4楼2018-09-11 21:34:54
【答案】应助回帖
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我们用的是秀丽隐杆线虫。 Trizol试剂盒提取。先收集L4时期的线虫，一般2000条到1.5ml EP管中加500ul trizol匀浆（研磨）2min，研磨后再加500 ul trizol ,RT孵育30min，加200 ul氯仿，vortex 15s，RT孵育15min，4℃离心（12000g/15min）.转移上层液相至新的1.5 ml EP管（不要吸到中间相），加500 ul 100%异丙醇，RT孵育10min ，RT离心（12000g/15min）,移走上层液体，加1ml 75%的酒精清洗，上下颠倒几次即可，RT离心（7500g/5min），吸走酒精，空气中干燥。加15 ul ddH2O溶解。 整个过程中要注意RNA酶的污染。 |
5楼2018-10-26 17:26:08