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新虫 (初入文坛)

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请问有人用过Golden Gate Assembly做多片段连接吗？引物设计除了Bsal限制性位点外还有5,末端要设计独特的几个基因，这个根据什么设计的啊

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1楼 2018-09-09 16:09:41

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drwhoknowss

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限制性位点外还有5，是因为这个酶的识别位点跟酶切位点，间距是5bp。
末端要设计几个碱基是因为，在识别位点旁边还要有其他碱基才能识别。
建议读一下NEB关于BsaI的FAQ，golden gate要求细节非常准确，一定要全搞清楚。
https://www.neb.com/products/r37 ... ;amp;%20Tech%20Tips

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner

2楼2018-09-09 22:46:00