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小噬魅

新虫 (初入文坛)

[求助] 知道基因CDS序列,怎么设计全长引物扩增全长序列已有3人参与

有CDS序列,想得到全长,怎么设计引物?该怎么做

@biostar2009 @youlinglyw @wizardfan @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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Huobol

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


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小噬魅(渊博震天代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-09-11 15:54:14
知道cDNA序列,也就是知道了ATG到终止子TAA或TAG或TGA的序列(真核),直接从两头数20几个碱基好了,通过工具验证上下游引物的退火温度差不多即可(55℃~65℃都行),只要PCR能P出目的带就说明引物没问题,有杂带就胶回收,换句话说,引物设计不必太完美。

另外,如果知道两端的UTR区,也完全可以在UTR区设计引物。PCR时以RNA反转录的cDNA为模板(真核)。
让羽毛再飞一会儿
4楼2018-09-11 09:55:12
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