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[求助]
这其实是一个实验室小白关于PCR的问题
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(第一次在小木虫发帖，也没找到合适的tag，见谅) 事情是这样子的： 实验总目的，是为了验证某个组织细胞有特定的蛋白。而因为抗体昂贵所以先确定一下细胞中是不是有此mra。 分工：每人负责两种组织细胞的检测。 过程：我们在NCBI上找到了对应蛋白，然后找到了它的mRNA, 点开得到了origin序列。 然后我们以此origin序列用NCBI上的blast得到了一些primer组，并自己选了其中的一组作为引物。 到实验室后，我们拿到了提取的自己所负责的细胞DNA，然后以20ul的体系(10ul酶，4ul水，1ul引物，5ul细胞DNA)做PCR混合体系，再放入pcr仪1小时48分钟(pcr这些退火温度，时间等没有问题)。 结果：我们跑的是1.5％的琼脂电泳，marker用的2000的，最终结果是，除了marker有清晰条带，其他的都没有条带，即PCR失败。 请问这是什么原因呢，引物设计是出了什么问题吗，， (我们的确有想过可能用RNA的引物去P DNA这个不太对，但是后来我们用肺的cDNA做实验也得到不太满意的结果，两管肺细胞cDNA,一个正常的、一个癌细胞的，但只跑出一管的条带，且大小与预计大小相差甚远) 求助 ，我们的目的是鉴定细胞中确实有某种rna特异性表达，应该从哪里下手呢? @gyesang 发自小木虫Android客户端 |
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