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鸽子?

金虫 (正式写手)

[交流] 肝脏组织提取蛋白WB8次跑不出来条带

肥胖小鼠肝脏组织提蛋白跑WB,总是出不来条带,上样量达到18ul,都没有条带,不知道什么原因。猜想是样品问题,因为本人提蛋白时,离心完了上清液浮着一层白色盖(可能是脂肪),本来应该是取上清液,这种情况下我只能破开白色盖子取中间未沉淀部分。不知道
有没有跟我一样遭遇的小伙伴,分享一下经验吧,各位懂的大神也给指点一下吧,万分感谢!另外,如果是蛋白降解了,有什么还能补充的防止蛋白降解办法吗,我下次提的时候一定注意。谢谢各位大神了,给点意见,谢谢。
说实话,我已经开始怀疑人生了。。。希望不要石沉大海。。。

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lcuwxy

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提取肝脏蛋白应该是一项很简单的事情,RIPA裂解液+蛋白酶抑制剂+磷酸酶抑制剂,混合均匀后加到组织中,组织匀浆破碎,之后接着超声破碎细胞,破碎后12000g 10min 4度离心,取上清(不要吸取到最上层的白色脂肪),测浓度加5*SDS loading buffer ,95度10min 煮完就可以WB了

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2楼2018-09-28 10:41:06
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鸽子?

金虫 (正式写手)

3楼2018-09-29 23:49:51
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鸽子?

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lcuwxy at 2018-09-28 10:41:06
提取肝脏蛋白应该是一项很简单的事情,RIPA裂解液+蛋白酶抑制剂+磷酸酶抑制剂,混合均匀后加到组织中,组织匀浆破碎,之后接着超声破碎细胞,破碎后12000g 10min 4度离心,取上清(不要吸取到最上层的白色脂肪),测 ...

您好老师,我想问问您提组织蛋白,样品需要用生理盐水清洗吗?我用生理盐水清洗了一下,样品损失太大了,但是如果不洗,裂解样品后上清比较混浊,而且白色脂肪盖子特别厚,有好的办法吗?十分感谢

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4楼2018-10-08 10:42:00
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